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意萧02

木虫 (正式写手)

[求助] 有关免疫组化试剂及时间的问题

我做的是大鼠卵巢的免疫组化,请问在免疫组化中:
(1)过氧化氢这一步大家都用几分钟?
(2)BSA药品的配置能用多久,大家是如何保存的?免疫组化中封闭的时间呢?
(3)一抗孵育过程中要怎么的效果才设置确定浓度?最好附图,谢谢。
(4)DAB显色水冲洗时间大概多少?
谢谢各位大神指导!小弟不胜感激。
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意萧02

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-06 11:41:40
奥 你们是这样做啊 我们一般是利用经验 如果抗体效果不是很好 我们稀释500倍,效果好我们一般稀释1000倍...

谢谢
6楼2013-06-07 10:12:43
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华农夏田

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
意萧02(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-06-04 18:09:36
意萧02: 金币+2, 有帮助, 有两个回复,另一个回复的满意些。 2013-06-05 19:51:22
我是这样做的:过氧化氢30min,BSA自带,30min,一抗浓度时间自己摸索吧,DAB看棕黄色背景立即停止反应,当然时间把握因实验而异。
要科研也要生活
2楼2013-06-04 16:23:09
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
意萧02(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-06-04 18:09:46
意萧02: 金币+1, 有帮助, 有帮助,谢谢 2013-06-05 19:51:52
(1)过氧化氢30min
(2)BSA最好现用现配,不过4°保存个1周问题不大,免疫组化封闭可以37°两个小时或者4°过夜,感觉4°过夜效果好些
(3)这个问题没听明白
(4)DAB显色一般是2-5min,不过建议时间不要太长,避免背景太深
3楼2013-06-04 16:46:38
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意萧02

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-04 16:46:38
(1)过氧化氢30min
(2)BSA最好现用现配,不过4°保存个1周问题不大,免疫组化封闭可以37°两个小时或者4°过夜,感觉4°过夜效果好些
(3)这个问题没听明白
(4)DAB显色一般是2-5min,不过建议时间不要太长 ...

第三问是说:设置的一抗的浓度时,我们一般不是都先做一个梯度看看那个浓度比较适合吗?所以我想问该按怎么样的效果设置浓度?
4楼2013-06-05 19:49:56
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