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necrosiser

铜虫 (小有名气)

[求助] sephadex LH20 初次使用中的迷惑

各位大侠,我正准备用LH20的胶分离中药,现在胶已经买到了,由于以前从未开展过成分分析,周围也没有人懂这个,虽然已经看了很多资料,但还有几个问题具体的细节没弄明白:
1. 用什么柱子好?我看到资料上说胶的直径是25~100um,那么柱子用什么好?有推荐的么?进口的柱子太贵的了
2. 我准备用按照相关文献选择洗脱液,包括纯化水、乙醇溶液、乙醇丙酮混合溶液和丙酮溶液洗脱。其中乙醇溶液比例有递增的要求。每种洗脱液100ml,没想清楚柱子用多大的好,或者柱子中装多少胶好?虽然知道胶用水、甲醇发起来后体积会增加4倍多一点。
3. 不同洗脱液之前如何衔接?前一个100ml比例的洗脱液用完后,直接用后一个比例、组分的洗脱液?那样会有影响么?我怎么去接分离出来的样品呢?
4. 中药分离,下游用什么波长的紫外线好?目前还不清楚有效成分是什么?只希望初步分离后确认效应,并再次过胶分离。还是每种洗脱液只接一个样品分析?

盼各位大侠指点迷津。
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sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
necrosiser: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-06 08:49:56
2.6cm*8cm?
不是连成分都不清楚么?柱子长度不够啊。
常压下出口端流速为多少滴/S?
这要看你给多大的液面差,液面差越大,流速越快。一般3、4秒钟一滴的样子吧。
有紫外检测仪最好了,没有的话,3-4ml一管一管地收集,然后到紫外分光计上测定。
9楼2013-06-06 08:41:00
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Decis

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
necrosiser: 金币+1, 有帮助 2013-06-05 11:28:51
你是用加压柱层析,还是常压柱层析。常压的话用玻璃柱就可以了。
sephadex 要求对分离的样品较纯才行,否则容易污染柱子。
小木虫,威力无穷
2楼2013-06-04 17:22:05
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w40256178

铁虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凝胶柱我们基本不怎么用  一般用反向制备就好了  很快的  效果很好啊   多交流啊
3楼2013-06-04 18:13:04
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necrosiser

铜虫 (小有名气)

这个胶既可以分子筛,也可以反相色谱
终身学习
4楼2013-06-05 08:49:38
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