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necrosiser

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[求助] sephadex LH20 初次使用中的迷惑

各位大侠，我正准备用LH20的胶分离中药，现在胶已经买到了，由于以前从未开展过成分分析，周围也没有人懂这个，虽然已经看了很多资料，但还有几个问题具体的细节没弄明白：
1. 用什么柱子好？我看到资料上说胶的直径是25~100um，那么柱子用什么好？有推荐的么？进口的柱子太贵的了
2. 我准备用按照相关文献选择洗脱液，包括纯化水、乙醇溶液、乙醇丙酮混合溶液和丙酮溶液洗脱。其中乙醇溶液比例有递增的要求。每种洗脱液100ml，没想清楚柱子用多大的好，或者柱子中装多少胶好？虽然知道胶用水、甲醇发起来后体积会增加4倍多一点。
3. 不同洗脱液之前如何衔接？前一个100ml比例的洗脱液用完后，直接用后一个比例、组分的洗脱液？那样会有影响么？我怎么去接分离出来的样品呢?
4. 中药分离，下游用什么波长的紫外线好？目前还不清楚有效成分是什么？只希望初步分离后确认效应，并再次过胶分离。还是每种洗脱液只接一个样品分析？

盼各位大侠指点迷津。

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终身学习

1楼 2013-06-03 20:57:35

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铜虫 (初入文坛)

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引用回帖:

8楼: Originally posted by necrosiser at 2013-06-05 11:31:57
我打算装柱体积为2.6cm*8cm，那么常压下出口端流速为多少滴/S？怎么监控？是隔几分钟接一管？

LH-20首先是粗分。既可以作为正向也可以用作反向。反向时有分子塞和疏水的作用。我看你选的柱子长度应该是远远不够，你也不用买国外进口的。就普通的玻璃常压柱就行了。http://www.bonabio.com/content-209.html，我们都用这种。再就是你说的流速是根据你装填凝胶的量来决定的，也就是柱床体积。假设你装了200ml填料，那你的流速最好控制在 0.5-1倍柱体积每小时，也就是相当于一小时100--200ml流出液，然后算一下一分钟留多少，一滴大约0.05ml，你就可以算出每秒多少滴了。再就是几分钟接一管。一般应该是柱体积的二十分之一到五十分之一。自己计算下吧。