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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助DNA提取！
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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 求助DNA提取！

这几天一直在提取细菌的DNA，我用的是上海生工的试剂盒，按照试剂盒的说明步骤提取的，可是电泳图上总是不出带，也不知道什么原因？郁闷中！不知大家有没有遇到过这样的问题？你们用的是什么试剂盒，我们实验室其他人用上海生工的试剂盒提DNA的结果都不理想，目的DNA出带都不明显，是不是试剂盒的问题啊？大虾们帮我分析分析阿！谢谢
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1楼 2007-10-12 20:33:16
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guohuayin

木虫 (著名写手)

博士，副教授
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
首先你先检测一下你的有没有提取出DNA，这个问题你可以先测定吸光度，同时也可以测定一下纯度，确定提取出来DNA后，再进行PCR扩增目的基因。扩增的时间一定要加入对照，看看PCR体系有没有问题。
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内生菌资源和核酸分子的利用
2楼2007-10-13 08:21:23
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自然风

铁杆木虫 (知名作家)

I'm loving plantsoil
★
plantsoil(金币+1,VIP+0):thx
你的试剂盒加酶之后处理的时间是不是比较短？因为试剂盒与常规提DNA的方法的差别之一就是试剂盒酶处理的时间要短得多，可能有这方面的原因。

另外，你的试剂盒是否是用柱子回收的？可以试试用常规的酚氯仿代替柱子回收看看，因为对于大片段的DNA，用柱子回收效果稍差。

还有，是不是因为样品的量比较少，才导致检测不清楚？

仅供参考
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世事喧嚣，人生寂寞
3楼2007-10-13 14:02:37
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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓
★
plantsoil(金币+1,VIP+0):thx
支持楼上的观点！！
     提取总DNA，破胞很关键！！
     上海生工的试剂盒都是用于一般菌体的提取，对胞外多糖多的细菌和革兰氏阳性菌，一般都比较难提取！
      另外，有时候，试剂盒提取的DNA量非常少，电泳检测不到，但可以用于PCR扩增目的基因，其他操作不宜！！
其实许多传统的方法提取效果都很好的！！
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4楼2007-10-13 15:02:49
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clf0803

银虫 (正式写手)
谢谢楼上的高手们！我一般用大概3-5ml的菌液作为一次抽提DNA的样品量，试剂盒加酶后按照说明的处理时间，有时细胞似乎破不了，柱纯化时都离心不下来，后来我延长处理时间，情况似乎改善不大，核酸电泳仍检测不到DNA。不知道高手们都采用什么方法抽提DNA，现在很急啊，大半个月都没提出来，后续实验无法进行，也找不到原因，请大家帮帮忙！
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5楼2007-10-13 21:18:38
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xiaopu_yin

金虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
你抽提的是细菌、放线菌还是酵母？我用的是博达泰克的试剂盒，一般用液氮或在－80度反复冻融几次就会有较好的效果。总之破胞很重要，而菌体量过多有时效果反而不好。
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6楼2007-10-14 09:23:12
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clf0803

银虫 (正式写手)
我抽提的是革兰氏阴性细菌的DNA
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7楼2007-10-14 15:37:30
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