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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » IgM抗体用CHO细胞表达不出（IgG已经成功表达）
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huoyongting

金虫 (正式写手)

[求助] IgM抗体用CHO细胞表达不出（IgG已经成功表达）

请教各位虫友，我把鼠抗体可变区基因克隆到人的IgG恒定区基因上，用CHO细胞表达出来有活性，然后将同样的可变区基因克隆到IgM的恒定区上，结果表达不出来，在上清中检测不到IgM的存在，已经确定IgM的基因没有问题，其他的序列跟IgG表达时的完全一样，请大家帮我分析下，谢谢
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1楼 2013-06-03 12:09:37
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huoyongting

金虫 (正式写手)
顶顶吧
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2楼2013-06-03 16:09:20
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生物小通

木虫 (正式写手)
这个真心不懂，帮顶吧，希望牛人解释，我也学习下
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学习，进步
3楼2013-06-03 21:46:00
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huoyongting

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 生物小通 at 2013-06-03 21:46:00
这个真心不懂，帮顶吧，希望牛人解释，我也学习下

谢谢
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4楼2013-06-04 08:12:52
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
祝楼主好运，我在用CHO表达融合蛋白，一点眉目都没有
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5楼2013-06-04 08:40:57
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whui

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-05 11:38:33
你的IgM序列是人源还是鼠源？有没有成功表达过其他抗体序列？
一般都是把IgM转IgG，你这样反转有什么意义吗？
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6楼2013-06-05 09:29:34
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huoyongting

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by whui at 2013-06-05 09:29:34
你的IgM序列是人源还是鼠源？有没有成功表达过其他抗体序列？
一般都是把IgM转IgG，你这样反转有什么意义吗？

IgM是人源的，网上密码子优化后全基因合成的，IgG的已经表达了好几种抗体了，IgM的还没有表达成功过，IgM是公司需要的特殊要求
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7楼2013-06-05 11:27:08
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whui

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

IgG表达成功好几种，说明你的IgG表达载体和细胞没问题
该IgG表达且有活性，说明V基因没问题。
IgM还没有成功表达过，那就是你们载体的问题了，与该抗体无关
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8楼2013-06-07 00:15:03
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huoyongting

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by whui at 2013-06-07 00:15:03
IgG表达成功好几种，说明你的IgG表达载体和细胞没问题
该IgG表达且有活性，说明V基因没问题。
IgM还没有成功表达过，那就是你们载体的问题了，与该抗体无关

但是我用来表达IgM的载体是跟IgG的一样的，就是重链恒定区序列不一样，轻链完全一样，我也考虑到这个问题，所以我想换一个载体试下
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9楼2013-06-07 08:38:51
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