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zouyoutu

木虫 (正式写手)

[交流] CHO表达重组抗体

最近用CHO细胞表达重组抗体，发酵上清和Protein A纯化后的样品用非还原SDS-PAGE检测，有一条完整分子量的抗体，还有一条带少了50KD左右，应该是只有重链，没有轻链的二聚体。现正在用Westernblot验证，想问问各位虫友，有谁遇到类似的情况，能否推荐几篇文献看看。谢谢

[ Last edited by zouyoutu on 2013-3-6 at 09:45 ]
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1楼 2013-03-04 21:54:50
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
★
zouyoutu(金币+1): 谢谢参与
如果能在纯化的时候去除的话，应该可以继续往下做。
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2楼2013-03-05 08:24:25
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zouyoutu

木虫 (正式写手)
纯化的时候是可以分开，但是有效表达量就低了。
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3楼2013-03-05 08:47:04
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小love肖

铜虫 (初入文坛)
★
zouyoutu(金币+1): 谢谢参与
应该是重链二聚体吧，可以用阳离子交换进一步纯化，那条带就没有了
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4楼2013-03-05 14:20:49
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zouyoutu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小love肖 at 2013-03-05 14:20:49
应该是重链二聚体吧，可以用阳离子交换进一步纯化，那条带就没有了

确实是重链二聚体，有没有办法在发酵的时候就减少这样的二聚体？您有没有见过文献报道？谢谢
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5楼2013-03-06 09:44:36
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shawne2008

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
zouyoutu(金币+1): 谢谢参与
zouyoutu: 金币+3 2013-06-17 16:18:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by zouyoutu at 2013-03-06 09:44:36
确实是重链二聚体，有没有办法在发酵的时候就减少这样的二聚体？您有没有见过文献报道？谢谢...

您是公司还是学校啊？
发酵的时候，我建议你优化一下金属离子的浓度以及PH、温度等控制参数
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6楼2013-03-06 20:08:45
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小love肖

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
zouyoutu: 金币+3 2013-06-17 16:19:00
二聚体的形成是因为在纯化过程中蛋白的二硫键被打开了，一种原因是，你的蛋白本身的结构中二硫键形成的不稳定，在PH变化的情况下，打开后就很难还原了；另一种原因就是你使用的培养基中含有还原性成分，例如DTT等，使蛋白中二硫键打开；我觉得发酵的时候应该严格控制PH，我也不知道还有什么好方法了
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7楼2013-03-08 10:30:21
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Language888楼
2013-03-09 08:46   回复  
zouyoutu(金币+1): 谢谢参与
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