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zouyoutu

木虫 (正式写手)


[交流] CHO表达重组抗体

最近用CHO细胞表达重组抗体,发酵上清和Protein A纯化后的样品用非还原SDS-PAGE检测,有一条完整分子量的抗体,还有一条带少了50KD左右,应该是只有重链,没有轻链的二聚体。现正在用Westernblot验证,想问问各位虫友,有谁遇到类似的情况,能否推荐几篇文献看看。谢谢

[ Last edited by zouyoutu on 2013-3-6 at 09:45 ]
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jiangyhai

金虫 (著名写手)



zouyoutu(金币+1): 谢谢参与
如果能在纯化的时候去除的话,应该可以继续往下做。
2楼2013-03-05 08:24:25
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zouyoutu

木虫 (正式写手)


纯化的时候是可以分开,但是有效表达量就低了。
3楼2013-03-05 08:47:04
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小love肖

铜虫 (初入文坛)



zouyoutu(金币+1): 谢谢参与
应该是重链二聚体吧,可以用阳离子交换进一步纯化,那条带就没有了
4楼2013-03-05 14:20:49
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zouyoutu

木虫 (正式写手)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 小love肖 at 2013-03-05 14:20:49
应该是重链二聚体吧,可以用阳离子交换进一步纯化,那条带就没有了

确实是重链二聚体,有没有办法在发酵的时候就减少这样的二聚体?您有没有见过文献报道?谢谢
5楼2013-03-06 09:44:36
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shawne2008

木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
zouyoutu(金币+1): 谢谢参与
zouyoutu: 金币+3 2013-06-17 16:18:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by zouyoutu at 2013-03-06 09:44:36
确实是重链二聚体,有没有办法在发酵的时候就减少这样的二聚体?您有没有见过文献报道?谢谢...

您是公司还是学校啊?
发酵的时候,我建议你优化一下金属离子的浓度以及PH、温度等控制参数
6楼2013-03-06 20:08:45
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小love肖

铜虫 (初入文坛)


★ ★ ★
zouyoutu: 金币+3 2013-06-17 16:19:00
二聚体的形成是因为在纯化过程中蛋白的二硫键被打开了,一种原因是,你的蛋白本身的结构中二硫键形成的不稳定,在PH变化的情况下,打开后就很难还原了;另一种原因就是你使用的培养基中含有还原性成分,例如DTT等,使蛋白中二硫键打开;我觉得发酵的时候应该严格控制PH,我也不知道还有什么好方法了
7楼2013-03-08 10:30:21
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简单回复
2013-03-09 08:46   回复  
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