应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 小分子（9KD）Trincine 胶且戊二醛固定后的转膜条件
51/1返回列表
查看: 1671  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

86967662

新虫 (初入文坛)

[求助] 小分子（9KD）Trincine 胶且戊二醛固定后的转膜条件

最近在做一种脂肪因子apelin，一抗购自abcam，第一次做的时候撞大运，用20％的SDS-PAGE做出来一个条带（非常不清晰），后来增大一抗浓度，延长或者减少转膜时间（一直为湿转，200mA恒流），但是目的条带再也没出现过，最近改用了TRICINE胶，跑胶后戊二醛固定，转膜条件为：湿转，200mA，1个小时。增大上样量为50ug/孔，低温条件，分离胶之前30V小电压跑，大约2-3h，溴酚蓝前锋指示剂进入分离胶约5mm时用100V电压，指示剂跑至距玻璃板下沿约5-10mm时停止电泳，电泳完成后用0.5%戊二醛30%乙醇混合液固定凝胶20min。转膜条件：0.22 NC膜，冰浴，200mA，60min。丽春红染色能在MARKER 10KD以下隐约看到条带，发光后片子上背景很深，目的条带隐约可见，颜色特别淡，现在的问题：1.转膜时间，在电泳跑完之后用戊二醛固定20分钟后，对于小分子 9KD，转膜时间大概需要多长，根据考马斯亮蓝染胶时间推测，200mA，1小时10分钟，2小时，胶上仍有小分子蛋白存在（见附件图片），请教老师，老师说戊二醛固定后，按照目前考染的结果看，再延长一个小时也没问题，今天延长转膜时间至2小时30分钟和3小时后，发光结果感觉还不如昨天1小时10分钟跑的。我觉得还是转膜时间问题，请前辈指教一下这种情况下小分子蛋白的转膜时间。
小分子（9KD）Trincine 胶且戊二醛固定后的转膜条件
第一次apelin.JPG


小分子（9KD）Trincine 胶且戊二醛固定后的转膜条件-1
转膜1小时10分钟的片子xiu.JPG


小分子（9KD）Trincine 胶且戊二醛固定后的转膜条件-2
转膜2小时后考染胶上仍可见xiu.JPG


小分子（9KD）Trincine 胶且戊二醛固定后的转膜条件-3
转膜2个半小时后考染xiu.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2013-05-31 19:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

86967662

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-01 04:36:05
我跑完胶就直接转膜了，不明白为什么要戊二醛固定？

请问您的电泳和转膜条件是怎么样的，求详细 protocol，做实验太虐心了。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-03 15:47:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-01 10:48:36
我跑完胶就直接转膜了，不明白为什么要戊二醛固定？
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-01 04:36:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 86967662 at 2013-06-03 15:47:51
请问您的电泳和转膜条件是怎么样的，求详细 protocol，做实验太虐心了。...

我做tricine一直是跑大胶的，所以电泳稳流跑过夜的。转膜时湿转300mA稳流1-1.5小时，在4°C层析柜里转的。0.22的膜应该没问题。
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-04 01:25:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 301求调剂 +6 yy要上岸呀 2026-03-17 6/300 2026-03-17 23:58 by 星空星月
[考研] 302求调剂 +6 呼呼呼。。。。 2026-03-17 6/300 2026-03-17 23:56 by 星空星月
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +8 曦熙兮 2026-03-15 8/400 2026-03-17 20:31 by xilongliang
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 8/400 2026-03-17 16:57 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-13 5/250 2026-03-17 10:15 by Sammy2
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭