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athena8102铁虫 (初入文坛)
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[求助]
关于引物设计的若干疑问，求高人指点 已有2人参与
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做引物设计啊，还是最简单的引物类型（因为不需要什么内切酶位点）。 楼主查文献啊各种查文献。 然后收集来了三对已经发表的引物的以及两组mRNA序列准备自己用PP5设计引物。 再然后问题来了。 1。先是兴致勃勃的自己设计引物，按照步骤照搬http://wenku.baidu.com/view/dafcdbfac8d376eeaeaa31d5.html，不难。 然后悲剧了，发现最高分值的pairs才八十多分，好吧，我不勉强，能用就行。而且也只有第一组最高的什么发卡结构、错配神马的比较符合。为了保险，我又把这个按照网上的引物验证的方法用oligo7去验证，为什么PP5设计出来的下游引物在原序列里面找不到match的序列啊（图2），这样是正常的吗？ 2.被自己设计的引物打击了之后，我又再一次曲线救国，我自己设计的不行我就用现有的呗，然后在一片很高端的文章里面选了一对序列，并且在genbank里面找到了它的mRNA序列。又一次参照步骤http://blog.163.com/wang_98/blog/static/103878549200982775128541/ 然后被显示的结果雷到了...是我打开的方式不对吗？是我打开的方式不对吗？  这个结果（图1）应该把能违反的引物原则都违反了吧...我很好奇这个高端洋气的文章是怎么把里面的实验做成功的。 我彻底的晕了...有人能指点一下吗？  360截图20130528141732796.jpg  360截图20130524205641582.jpg |
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