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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] T载体自连

做蓝白斑筛选的时候,空白使用不含目的片段的T载体+感受态+SOC培养基做的,但是每次平板里面长出来的白斑和蓝斑都不少,绝大部分是蓝斑。抗生素、X-GAL、IPTG都没有问题,这是载体自连吗?有什么方法减少载体自连的?
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实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-05-28 19:48:21
蓝白斑的颜色变化比菌落长得慢,你可以在转化完了,菌长好了之后,放在四度1到2天,这样没来得及变成蓝色的假阳性就都变成蓝色了,然后你再看看效率。只要泛蓝,就是蓝斑,再挑白斑,成功率高点,如果都是蓝的,那就是T载体的问题或者是你insert的问题,跑个电泳确认一下insert的质量,而且insert往死了多加没事的。。。。。。。。。。。
有啥不高兴的事儿,说出来大家乐呵乐呵~
9楼2013-05-28 08:49:05
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protura

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-05-28 19:47:55
个人经验,空白对照中的载体自连是难以避免的,蓝白斑筛选并不绝对,有时做克隆时挑取的白斑也是阴性。只好每次加大挑取菌落的数量,比如3-5个,确保能挑到阳性克隆。
2楼2013-05-28 08:23:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
说明T载体质量不行了。是不是放时间久了?
3楼2013-05-28 08:23:22
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by protura at 2013-05-28 08:23:03
个人经验,空白对照中的载体自连是难以避免的,蓝白斑筛选并不绝对,有时做克隆时挑取的白斑也是阴性。只好每次加大挑取菌落的数量,比如3-5个,确保能挑到阳性克隆。

我上次一次性挑了20个,结果全是假阳性
4楼2013-05-28 08:29:56
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