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卢尔夏

铁虫 (初入文坛)

[求助] 如果一个外源基因对细菌有毒性,如何构建过表达载体/回补载体

我有个2700bp的拟南芥基因,已经构建到KS+上并且测序成功了,双酶切(PstI和SalI)后连接到1301S2上做过表达却怎么也连不上,我自己做了十几次,找别人帮忙做了3次也做不出来,每次都是一个克隆都没有;后来找公司做,公司也重复了4次,有很多克隆,但是都是假阳性,一个阳性克隆都没有。会不会是这个基因对细菌有毒性呢?如果是的话,要如何构建过表达载体/回补载体呢?(这个基因用BamHI和XhoI连PBI121也是这种情况)
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卢尔夏

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-05-23 20:50:21
真核启动子在细菌里面不表达吧

如果是这样,那载体一直构建失败是什么原因呢,我实在找不到问题了
3楼2013-05-24 15:08:53
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gyesang

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-24 09:53:18
真核启动子在细菌里面不表达吧
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-05-23 20:50:21
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