11楼: Originally posted by β内酰胺 at 2013-05-24 10:33:54
不是高人，也就是一起交流学习呀。
我刚才比对了一下序列，是插入了一个碱基和缺失了一个碱基吧，应该会发生移码突变，不知道你后续做什么，估计会有影响的。建议你用高保真酶pfu扩一下重新构建载体。
B片段才900 ...

6楼: Originally posted by zhangj0754 at 2013-05-23 14:22:43
我们一般是用TAKARA的PrimeSTAR酶扩，然后连全式金的pEASY-Blunt 载体，测序，再双酶切，我一般切4小时，回收片段测浓度，载体与片段比例一般1：10，载体用100ng左右， 我们用TAKARA的连接酶，20ul 体系，16度一般连 ...