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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 做过细菌表面疏水性和自凝集试验的大神给点指导
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)

[求助] 做过细菌表面疏水性和自凝集试验的大神给点指导 已有2人参与

本人正在做一些益生菌菌株的表面疏水性和自凝集试验，本以为比较简单，但是做出来结果明显不对，我把我做的步骤写下来，大家给指导下到底哪里出了问题。
表面疏水性：1、将过夜培养菌液12000rpm离心5分钟，然后用生理盐水洗2次，每次加5ml生理盐水；
2、洗好的菌用生理盐水调到OD600 大约0.6左右；
3、取3ml调好OD的菌液+0.6ml二甲苯，涡旋仪震荡90s，然后放置15min；
4、用枪将上层二甲苯全部吸走，然后测下层水相的OD600值。
但是每次测后面水相的OD值都比之前没加二甲苯的还要大，而且上层二甲苯明显也没看到菌融到里面去，看了很多文献都会测出一个值，我这样算出来就是负值了，做了很多菌（40株左右了），结果都是后面比前面大，看的文献里面人家都能测出有表面疏水性只是大小的问题。不知道问题出在那里了，请大神指导下。
自凝集试验：1、将过夜培养菌液12000rpm离心5分钟，然后用生理盐水洗2次，每次加5ml生理盐水；
2、洗好的菌用生理盐水调到OD600 大约0.25左右；
3、室温放置20h；
4、文献上说这时候测定菌液的OD，这块我就搞不明白了，放置20h后就会出现分层现象，这时候到底吸那一部分来测OD那？
这2个问题纠结了很久，希望各位能给与指点，谢谢！
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1楼 2013-05-20 19:44:18
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alimar

金虫 (小有名气)
我也做出来是负值，晕。
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2楼2013-05-21 13:18:48
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by alimar at 2013-05-21 13:18:48
我也做出来是负值，晕。

找到问题没
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3楼2013-05-21 15:16:49
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alimar

金虫 (小有名气)
找到就直接应助了
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4楼2013-05-21 18:42:35
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)
没人知道嘛
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5楼2013-05-22 11:38:57
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)
求指导
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6楼2013-05-27 22:44:20
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lanedysia

银虫 (初入文坛)
自凝集实验当然是测上清的OD啦。文献：Identification and characterization of a gene that controls colony morphology and auto-aggregation in Escherichia coli K12或者Auto-aggregation and Co-aggregation ability in bifidobacteria and clostridia。自己看下文献吧，很短小的
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7楼2014-03-05 14:27:13
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JIANGJIANWEI

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小小佐罗2: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-10-08 08:37:07
我起初的实验也是负值，后来我把培养时间减少了，结果就好了，我认为是培养时间的问题，可能是你的菌到了衰亡期了，摇12个小时或者是静止18小时就可以，希望对你有帮助。
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8楼2014-09-30 15:50:08
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齐宝

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by JIANGJIANWEI at 2014-09-30 15:50:08
我起初的实验也是负值，后来我把培养时间减少了，结果就好了，我认为是培养时间的问题，可能是你的菌到了衰亡期了，摇12个小时或者是静止18小时就可以，希望对你有帮助。

你好，我想问下你也是用比色皿测吗？我查中文文献加4mL，英文文献用的是一次性塑料比色皿，加的是1mL，我觉得用的比色皿和加的溶液体积都有影响吧。
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9楼2015-12-07 10:49:41
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wo的海宝圆圆

新虫 (小有名气)
我想请问用的是对二甲苯还是邻二甲苯？

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10楼2015-12-10 20:23:20
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