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小小佐罗2

木虫 (正式写手)

[求助] 做过细菌表面疏水性和自凝集试验的大神给点指导 已有2人参与

本人正在做一些益生菌菌株的表面疏水性和自凝集试验,本以为比较简单,但是做出来结果明显不对,我把我做的步骤写下来,大家给指导下到底哪里出了问题。
表面疏水性:1、将过夜培养菌液12000rpm离心5分钟,然后用生理盐水洗2次,每次加5ml生理盐水;
2、洗好的菌用生理盐水调到OD600 大约0.6左右;
3、取3ml调好OD的菌液+0.6ml二甲苯,涡旋仪震荡90s,然后放置15min;
4、用枪将上层二甲苯全部吸走,然后测下层水相的OD600值。
但是每次测后面水相的OD值都比之前没加二甲苯的还要大,而且上层二甲苯明显也没看到菌融到里面去,看了很多文献都会测出一个值,我这样算出来就是负值了,做了很多菌(40株左右了),结果都是后面比前面大,看的文献里面人家都能测出有表面疏水性只是大小的问题。不知道问题出在那里了,请大神指导下。
自凝集试验:1、将过夜培养菌液12000rpm离心5分钟,然后用生理盐水洗2次,每次加5ml生理盐水;
2、洗好的菌用生理盐水调到OD600 大约0.25左右;
3、室温放置20h;
4、文献上说这时候测定菌液的OD,这块我就搞不明白了,放置20h后就会出现分层现象,这时候到底吸那一部分来测OD那?
这2个问题纠结了很久,希望各位能给与指点,谢谢!
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alimar

金虫 (小有名气)

我也做出来是负值,晕。
2楼2013-05-21 13:18:48
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by alimar at 2013-05-21 13:18:48
我也做出来是负值,晕。

找到问题没
3楼2013-05-21 15:16:49
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alimar

金虫 (小有名气)

找到就直接应助了
4楼2013-05-21 18:42:35
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)

没人知道嘛
5楼2013-05-22 11:38:57
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)

求指导
6楼2013-05-27 22:44:20
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lanedysia

银虫 (初入文坛)

自凝集实验当然是测上清的OD啦。文献:Identification and characterization of a gene that controls colony morphology and auto-aggregation in Escherichia coli K12或者Auto-aggregation and Co-aggregation ability in bifidobacteria and clostridia。自己看下文献吧,很短小的
7楼2014-03-05 14:27:13
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JIANGJIANWEI

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小小佐罗2: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-10-08 08:37:07
我起初的实验也是负值,后来我把培养时间减少了,结果就好了,我认为是培养时间的问题,可能是你的菌到了衰亡期了,摇12个小时或者是静止18小时就可以,希望对你有帮助。
8楼2014-09-30 15:50:08
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齐宝

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by JIANGJIANWEI at 2014-09-30 15:50:08
我起初的实验也是负值,后来我把培养时间减少了,结果就好了,我认为是培养时间的问题,可能是你的菌到了衰亡期了,摇12个小时或者是静止18小时就可以,希望对你有帮助。

你好,我想问下你也是用比色皿测吗?我查中文文献加4mL,英文文献用的是一次性塑料比色皿,加的是1mL,我觉得用的比色皿和加的溶液体积都有影响吧。
9楼2015-12-07 10:49:41
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wo的海宝圆圆

新虫 (小有名气)

我想请问用的是对二甲苯还是邻二甲苯?

发自小木虫IOS客户端
10楼2015-12-10 20:23:20
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