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小小佐罗2

木虫 (正式写手)

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[求助] 做过细菌表面疏水性和自凝集试验的大神给点指导已有2人参与

本人正在做一些益生菌菌株的表面疏水性和自凝集试验，本以为比较简单，但是做出来结果明显不对，我把我做的步骤写下来，大家给指导下到底哪里出了问题。
表面疏水性：1、将过夜培养菌液12000rpm离心5分钟，然后用生理盐水洗2次，每次加5ml生理盐水；
2、洗好的菌用生理盐水调到OD600 大约0.6左右；
3、取3ml调好OD的菌液+0.6ml二甲苯，涡旋仪震荡90s，然后放置15min；
4、用枪将上层二甲苯全部吸走，然后测下层水相的OD600值。
但是每次测后面水相的OD值都比之前没加二甲苯的还要大，而且上层二甲苯明显也没看到菌融到里面去，看了很多文献都会测出一个值，我这样算出来就是负值了，做了很多菌（40株左右了），结果都是后面比前面大，看的文献里面人家都能测出有表面疏水性只是大小的问题。不知道问题出在那里了，请大神指导下。
自凝集试验：1、将过夜培养菌液12000rpm离心5分钟，然后用生理盐水洗2次，每次加5ml生理盐水；
2、洗好的菌用生理盐水调到OD600 大约0.25左右；
3、室温放置20h；
4、文献上说这时候测定菌液的OD，这块我就搞不明白了，放置20h后就会出现分层现象，这时候到底吸那一部分来测OD那？
这2个问题纠结了很久，希望各位能给与指点，谢谢！

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