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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助分离纯化高手
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)

[求助] 求助分离纯化高手

本人做的是放线菌发酵液胞外多糖的提取和分离纯化，试验流程是这样的：用黄豆培养基得到的发酵液上清减压浓缩，乙醇醇沉，分别得到上清1和沉淀1，乙醇醇沉完的上清液1再次甲醇醇沉，分别得上清2和沉淀2.
小老板之前做的是沉淀1中的多糖的提取，我也做过，做到后来发现没有活性，就没往后做。后来发现甲醇醇沉的沉淀2有活性。硫酸苯酚检测有糖的颜色反应，不含蛋白质，怀疑有一种低聚糖（分子量在1500以下），所以开始做的它的分离纯化。
目前做过各种方法纯化，DEAE-52，凝胶，阴阳离子交换树脂，大孔树脂，都没得到理想的结果。在这里最困扰我的是培养基里的盐组分，因为用到的是海水晶，所以不知道会是什么盐最后在我的粗品里，而且由于分子量不大除盐很困难。所以想请教一下这方面的高手指导我一下，有什么比较好的方法来分离纯化出我想要的组分。
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1楼2013-05-16 14:23:30
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

wizardfan: 因为你的回答没有起到作用 2013-05-17 08:07:09
引用回帖:
4楼: Originally posted by yvonne_mi at 2013-05-16 16:17:19
我能买到的透析袋最额小截留分子量是1000，我做过，结果我的粗品也透掉了，问过生工，100的巨贵！...

楼主别回复啊，来点实惠的。巨贵是多贵？呵呵
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5楼2013-05-16 15:49:22
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)
忘记标明了  我的粗品极易溶于水，拿凝胶收到的一部分不是很纯的组分点了硅胶G板在紫外365nm下中间是暗斑，只有最外面的边是荧光的，不知道怎么回事，是不纯的原因？同时也做了三氟乙酸的酸水解，发现120度12h很难水解，但是从液相上分析还是出现了一部分葡萄糖，另外就是我的那个组分峰和组分旁边的一个峰，怀疑是葡萄糖水解后留下来的那部分。
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2楼2013-05-16 14:41:58
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是考虑除盐的话，可以做透析，或者超滤除盐。
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3楼2013-05-16 14:58:20
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-05-16 14:58:20
如果是考虑除盐的话，可以做透析，或者超滤除盐。

我能买到的透析袋最额小截留分子量是1000，我做过，结果我的粗品也透掉了，问过生工，100的巨贵！
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4楼2013-05-16 15:17:19
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