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yvonne_mi

木虫 (正式写手)

[求助] 求助分离纯化高手

本人做的是放线菌发酵液胞外多糖的提取和分离纯化,试验流程是这样的:用黄豆培养基得到的发酵液上清减压浓缩,乙醇醇沉,分别得到上清1和沉淀1,乙醇醇沉完的上清液1再次甲醇醇沉,分别得上清2和沉淀2.
小老板之前做的是沉淀1中的多糖的提取,我也做过,做到后来发现没有活性,就没往后做。后来发现甲醇醇沉的沉淀2有活性。硫酸苯酚检测有糖的颜色反应,不含蛋白质,怀疑有一种低聚糖(分子量在1500以下),所以开始做的它的分离纯化。
目前做过各种方法纯化,DEAE-52,凝胶,阴阳离子交换树脂,大孔树脂,都没得到理想的结果。在这里最困扰我的是培养基里的盐组分,因为用到的是海水晶,所以不知道会是什么盐最后在我的粗品里,而且由于分子量不大除盐很困难。所以想请教一下这方面的高手指导我一下,有什么比较好的方法来分离纯化出我想要的组分。
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)

忘记标明了  我的粗品极易溶于水,拿凝胶收到的一部分不是很纯的组分点了硅胶G板在紫外365nm下中间是暗斑,只有最外面的边是荧光的,不知道怎么回事,是不纯的原因?同时也做了三氟乙酸的酸水解,发现120度12h很难水解,但是从液相上分析还是出现了一部分葡萄糖,另外就是我的那个组分峰和组分旁边的一个峰,怀疑是葡萄糖水解后留下来的那部分。
2楼2013-05-16 14:41:58
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果是考虑除盐的话,可以做透析,或者超滤除盐。
3楼2013-05-16 14:58:20
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-05-16 14:58:20
如果是考虑除盐的话,可以做透析,或者超滤除盐。

我能买到的透析袋最额小截留分子量是1000,我做过,结果我的粗品也透掉了,问过生工,100的巨贵!
4楼2013-05-16 15:17:19
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

wizardfan: 因为你的回答没有起到作用 2013-05-17 08:07:09
引用回帖:
4楼: Originally posted by yvonne_mi at 2013-05-16 16:17:19
我能买到的透析袋最额小截留分子量是1000,我做过,结果我的粗品也透掉了,问过生工,100的巨贵!...

楼主别回复啊,来点实惠的。巨贵是多贵?呵呵
5楼2013-05-16 15:49:22
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yangdayuan

金虫 (小有名气)

可以用凝胶过滤G10应该可以除盐,而你的样品不会下来
顺其自然,为所当为
6楼2013-09-25 14:29:36
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