| 查看: 4037 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
如何去除RNA提取过程中的蛋白质污染
|
||
|
大家好！我目前正在构建cDNA文库，需要高质量的RNA。提取的材料是杨树叶片，最先我是用Trizol 提取的，提取到的RNA对OD值检测，发现OD260/OD280的范围在1.8~2.0之间，但电泳检测时加样孔总会发亮，也就是会有蛋白质的污染，直接用此法提取的RNA构建文库时总是很不理想。后来，我在takara 购买了RNAiso 试剂配合Fruit-mate试剂进行提取（这两种试剂是针对多糖多酚植物材料的），提取后检测，OD260/OD280的范围在1.8~2.0之间，但电泳时加样孔也会发亮，此法也不能有效的去除蛋白质。之后，我对Trizol提取后的RNA进行LiCL沉淀，配制5M LiCL沉淀液（配制方法为：称取LiCL 42.4g，Tris 0.4846g，EDTA 0.5846g溶于150ml DEPC处理水中，用5N NaOH 高PH 为7.4，之后DEPC处理水定容到200ml，高压灭菌），等量加入提取后的RNA中，-80度静置两小时，拿出后4度，14000rpm离心20min， 弃上清，可看到半透明状的沉淀。用预冷的75%乙醇清洗沉淀一次，7500rpm 离心5min，发现沉淀变成乳白色，加DEPC处理水，发现此沉淀很难溶解（已室温静置约10min，不溶，进行漩涡振荡，也不溶），随后，直接用此未完全溶解的RNA提取样进行检测，发现OD260/OD280大于1.8，有的甚至在2.0以上 ，但制胶电泳检测，加样孔仍会发亮，蛋白质仍旧没有除尽。 对于此文库构建，我已进行半年多，仍旧没有进展，问题总是出现在RNA的提取上。究竟要怎样才能除尽RNA中的蛋白质呢？请高手帮忙，感激不尽！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有243人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
15楼2014-05-13 18:16:00
2楼2013-05-16 10:09:21
3楼2013-05-16 10:33:45
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
4楼2013-05-16 12:21:21
