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蓝慧

木虫 (正式写手)

[求助] PCR 滞孔

各位虫子,最近做PCR实在是头痛,重复了几次都是这样的。求各位好心的虫子帮帮忙,看下是什么原因。

用的酶是Takara PrimeStar Max Premix, 体系为20ul, 引物0.4ul.
反应条件是94度3min, 98度10s, 55-58度均试过 15s, 72度1min, 35cycles.目的片段长度是1800bp,

望各位虫子多多发表意见。

玉米根系PCR.jpg
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wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-05-18 16:57:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by 蓝慧 at 2013-05-16 16:21:13
模板是基因组DNA...

DNA提取效果如何?另外必须先确认下引物有效,你是自己设计的引物,文献中查阅的,还是随机引物?
8楼2013-05-16 17:39:32
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wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蓝慧: 金币+1, 有帮助 2013-05-16 16:21:59
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-18 16:56:54
模版是什么?看图感觉啥都没有扩出来,孔里亮是蛋白污染
2楼2013-05-15 22:08:44
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蓝慧(myprayer代发): 金币+1, 感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-16 08:24:35
蓝慧: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-16 16:22:17
目的基因根本没p出来嘛。原因:1退火温度过高,试试52,50,48的;2退火时间改30s;3延伸时间2min。祝楼主能成功,pcr扩增本来就的慢慢来的。
要么读书,要么旅行,身体和灵魂,必须有一个在路上
3楼2013-05-15 22:24:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蓝慧(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-16 08:24:45
蓝慧: 金币+2 2013-05-16 16:23:15
感觉模板加多了,PCR产物电泳一般看不到模板。点样孔附近的亮带是模板里的DNA蛋白复合物。
4楼2013-05-16 06:52:26
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