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hugang2004_2000木虫 (正式写手)
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[交流]
大质粒转化中有什么提高转化率的方法吗？急！！！
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请教大家，比较大的酶连产物（12kb）在转化到大肠杆菌中的时候有什么提高转化效率的方法吗？我们做的感受态大肠杆菌就是用分子克隆中的CaCl2方法，转化的大体步骤如下： 1. 酶连产物加入到200ul感受态细胞悬液中，flicking slightly 2. 冰上30分钟 3. 42度热激90秒 4. 冰上5分钟immediately 5. 超净台中加入1ml LB 6. 37度静置1h 7. 5000rpm, RT, 5min 8. 倾出大部分上清液，剩余大约200ul 9. plating 10. 37度倒置培养12-16小时 11. 挑取克隆 但是转化后总是没有克隆，用这种方法做的时候，其他比较小的酶连产物（<9kb）的转化结果都挺成功的，因此就觉得症结所在就是酶连产物太大，还没有找到合适的解决方法，拖了挺长时间了，请大家多多帮忙！！谢谢！！ |
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hugang2004_2000
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谢谢！ 值得高兴的是今天终于转化出来了，菌液 PCR的结果也是对的，真是高兴坏了！哈哈！ 只是，以后光这么重复也不是办法啊！下次试试上面的方法。具体的方法我先查一下吧，或者johnsooh那里有具体的实验方法？能否共享？多谢！ 我的信箱是：hugang2004_2000@yahoo.com.cn 十分感谢大家，祝大家节日快乐！ |
5楼2007-10-03 15:44:16
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hugang2004_2000
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