| 查看: 1235 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
hugang2004_2000木虫 (正式写手)
|
[交流]
大质粒转化中有什么提高转化率的方法吗？急！！！
|
||
|
请教大家，比较大的酶连产物（12kb）在转化到大肠杆菌中的时候有什么提高转化效率的方法吗？我们做的感受态大肠杆菌就是用分子克隆中的CaCl2方法，转化的大体步骤如下： 1. 酶连产物加入到200ul感受态细胞悬液中，flicking slightly 2. 冰上30分钟 3. 42度热激90秒 4. 冰上5分钟immediately 5. 超净台中加入1ml LB 6. 37度静置1h 7. 5000rpm, RT, 5min 8. 倾出大部分上清液，剩余大约200ul 9. plating 10. 37度倒置培养12-16小时 11. 挑取克隆 但是转化后总是没有克隆，用这种方法做的时候，其他比较小的酶连产物（<9kb）的转化结果都挺成功的，因此就觉得症结所在就是酶连产物太大，还没有找到合适的解决方法，拖了挺长时间了，请大家多多帮忙！！谢谢！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
参与限项
已经有3人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有7人回复
-
实验室接单子
已经有4人回复
-
全日制（定向）博士
已经有4人回复
-
对氯苯硼酸纯化
已经有3人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有12人回复
-
不自信的我
已经有12人回复
-
所感
已经有4人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复
-
北核录用
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
hugang2004_2000
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2022
- 散金: 325
- 红花: 2
- 帖子: 671
- 在线: 201.5小时
- 虫号: 263575
- 注册: 2006-07-02
- 性别: GG
- 专业: 植物学
3楼2007-10-03 01:03:02
2楼2007-10-02 21:05:12
4楼2007-10-03 11:07:04
hugang2004_2000
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2022
- 散金: 325
- 红花: 2
- 帖子: 671
- 在线: 201.5小时
- 虫号: 263575
- 注册: 2006-07-02
- 性别: GG
- 专业: 植物学
|
谢谢！ 值得高兴的是今天终于转化出来了，菌液 PCR的结果也是对的，真是高兴坏了！哈哈！ 只是，以后光这么重复也不是办法啊！下次试试上面的方法。具体的方法我先查一下吧，或者johnsooh那里有具体的实验方法？能否共享？多谢！ 我的信箱是：hugang2004_2000@yahoo.com.cn 十分感谢大家，祝大家节日快乐！ |
5楼2007-10-03 15:44:16