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Francis_zw

铜虫 (初入文坛)

[求助] 荧光发光菌实验,急急急!

小弟最近在做荧光发光菌急性毒理实验,,碰到一些问题。
基本原理:我的菌能表达一个蛋白frex,它能与菌内的NADH产生binding,然后发出荧光,文献中给出的纯蛋白的荧光激发波长(EX)为498nm,发射波长(EM)为518nm,但是我想用的是活菌体做实验,就遇到了一些问题。

1请问怎么确定该菌最佳荧光激发波长和发射波长是多少?
补充:其实,我已经按照一些虫友的意见,全波长扫描,步骤如下,确定EM=518nm扫EX,或确定EX=498nm扫EM,但结果却不能跟纯蛋白吻合,我所得的结果非常奇怪,就是无论我EX或EM设定为多少,那么相应的最大峰也是该值,例如,EX=500nm扫描,那么EM=500出现最大峰值。


2它是荧光发光,为fluroscense,而明亮发光杆菌T3是luminenscence,请问二者有和区别?


3菌体荧光发光实验,有没有统一的标准,例如我查文献单位体积内,发光的光子需满足300万~500万,如何使每次实验都能控制在此范围。


4, 如何提高菌体对毒物的敏感性?


集思广益,忘广大虫友不吝赐教,谢谢大家啦!
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  • 附件 1 : GeneticallyencodedfluorescentsensorsforintracellularNADHdetection..pdf
  • 2013-05-14 19:26:13, 1.54 M

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Francis_zw

铜虫 (初入文坛)

小木虫太令我伤心,还是去丁香园吧。。
2楼2013-05-15 20:15:44
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