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半夏今年

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除

本人现在在做大肠杆菌基因敲除实验，想问一下PCR产物经Dpni酶切以消除模板质粒，这个消除时间是多少，有没有一个可靠的时间？我之前做是酶切过夜，但看文献上好像没这么久的，，，，，
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1楼 2013-05-14 09:53:53
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Tporker

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:16:23
一般两三个小时就行了！模板质粒的降解不是单一的方向和位点，所以不用那么长时间！
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值，夜渐浓，闻窗外蛙鸣，辗转无眠难入梦；此，风渐清，听庭内雨应，悱恻浮醒忆青笼。
2楼2013-05-14 16:44:05
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-15 03:16:31
我用40分钟也可以的.
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3楼2013-05-14 20:12:46
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peng5053

银虫 (正式写手)

Dr.

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:16:39
DpnI主要是为了消除模版污染，一般1-2小时就可以啦。
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多点思维，多点idea
4楼2013-05-14 20:49:07
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半夏今年

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by peng5053 at 2013-05-14 20:49:07
DpnI主要是为了消除模版污染，一般1-2小时就可以啦。

这个不同的体系是有区别的吗？我用100微升体系
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5楼2013-05-15 15:24:55
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
体系，酶的量，还有酶切时间都有关系吧，我一般也是酶切过夜，为的是酶切完全，其实我们平常酶切时间可能并不用这么长，这不是为了防止污染嘛，所以长点没坏处吧
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6楼2013-05-15 20:48:58
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半夏今年

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hyacinth326 at 2013-05-15 20:48:58
体系，酶的量，还有酶切时间都有关系吧，我一般也是酶切过夜，为的是酶切完全，其实我们平常酶切时间可能并不用这么长，这不是为了防止污染嘛，所以长点没坏处吧

恩恩  我也这么想的  我怕的就是这么久对别的没影响的吧？
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7楼2013-05-16 09:41:31
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8601

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我做过37度1小时。酶就用1微升。效果不错，提的质粒正确率90%
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8楼2013-05-20 07:22:27
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