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半夏今年

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除

本人现在在做大肠杆菌基因敲除实验,想问一下PCR产物经Dpni酶切以消除模板质粒,这个消除时间是多少,有没有一个可靠的时间?我之前做是酶切过夜,但看文献上好像没这么久的,,,,,
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Tporker

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-15 03:16:23
一般两三个小时就行了!模板质粒的降解不是单一的方向和位点,所以不用那么长时间!
值,夜渐浓,闻窗外蛙鸣,辗转无眠难入梦;此,风渐清,听庭内雨应,悱恻浮醒忆青笼。
2楼2013-05-14 16:44:05
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2013-05-15 03:16:31
我用40分钟也可以的.
3楼2013-05-14 20:12:46
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peng5053

银虫 (正式写手)

Dr.

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-15 03:16:39
DpnI主要是为了消除模版污染,一般1-2小时就可以啦。
多点思维,多点idea
4楼2013-05-14 20:49:07
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半夏今年

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by peng5053 at 2013-05-14 20:49:07
DpnI主要是为了消除模版污染,一般1-2小时就可以啦。

这个不同的体系是有区别的吗?我用100微升体系
5楼2013-05-15 15:24:55
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
体系,酶的量,还有酶切时间都有关系吧,我一般也是酶切过夜,为的是酶切完全,其实我们平常酶切时间可能并不用这么长,这不是为了防止污染嘛,所以长点没坏处吧
6楼2013-05-15 20:48:58
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半夏今年

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hyacinth326 at 2013-05-15 20:48:58
体系,酶的量,还有酶切时间都有关系吧,我一般也是酶切过夜,为的是酶切完全,其实我们平常酶切时间可能并不用这么长,这不是为了防止污染嘛,所以长点没坏处吧

恩恩  我也这么想的  我怕的就是这么久对别的没影响的吧?
7楼2013-05-16 09:41:31
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8601

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我做过37度1小时。酶就用1微升。效果不错,提的质粒正确率90%
8楼2013-05-20 07:22:27
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