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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 碱性蛋白Native-PAGE
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-27 00:49:43
单体是多大呢？BN-PAGE一般看不到分子量小的蛋白，一般可以看到多聚体或者是蛋白复合物。胶的配方和做法可以参考下面的文献。
Cline and Mori (2001) J Cell Biol 154:719-729...

单体的分子量在20-30kd
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11楼2013-05-27 08:32:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励 交流 2013-05-28 08:25:03
引用回帖:
11楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-05-27 08:32:04
单体的分子量在20-30kd...

分子量有些小，BN胶上可以看到50左右的。我觉得小于30不太好。不过你可以试试增加胶的浓度。
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12楼2013-05-28 07:59:22
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-28 07:59:22
分子量有些小，BN胶上可以看到50左右的。我觉得小于30不太好。不过你可以试试增加胶的浓度。...

恩，看看吧，我还想问就是native-page跑完电泳以后需要固定蛋白吗？！
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13楼2013-05-28 08:41:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-05-28 08:41:11
恩，看看吧，我还想问就是native-page跑完电泳以后需要固定蛋白吗？！...

你想染色的话是要固定的。不过考染的染液本身有固定作用，不用特意去固定。
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14楼2013-05-29 07:07:00
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-29 07:07:00
你想染色的话是要固定的。不过考染的染液本身有固定作用，不用特意去固定。...

那都有哪些固定方法呢？！戊二醛固定蛋白可以吗？！
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15楼2013-05-29 08:32:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
飘零的叶子: 金币+9, ★★★很有帮助 2013-06-01 13:18:01
引用回帖:
15楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-05-29 08:32:37
那都有哪些固定方法呢？！戊二醛固定蛋白可以吗？！...

蛋白一般是用甲醇-醋酸固定。
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16楼2013-05-30 06:07:38
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-30 06:07:38
蛋白一般是用甲醇-醋酸固定。...

现在貌似不是固定的问题了，我感觉是我的蛋白直接没有往胶里跑，用已知的碱性蛋白纯品做了对照，这个对照是有条带的，但是我的目的蛋白一点条带都没有，这会是什么原因呢？！
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17楼2013-05-30 18:51:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
飘零的叶子: 金币+5, ★有帮助 2013-05-31 08:42:52
你的样品是膜蛋白吗？如果是膜蛋白，需要用弱的去垢剂增溶，否则蛋白在脂分子里，跑不下来的。
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18楼2013-05-31 08:34:43
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-31 08:34:43
你的样品是膜蛋白吗？如果是膜蛋白，需要用弱的去垢剂增溶，否则蛋白在脂分子里，跑不下来的。

应该不是膜蛋白吧，是用大肠杆菌表达的重组蛋白，在破碎上清里
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19楼2013-05-31 08:42:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-05-31 08:42:42
应该不是膜蛋白吧，是用大肠杆菌表达的重组蛋白，在破碎上清里...

你跑的样品是纯化的重组蛋白还是从组织里提取的蛋白？如果是重组蛋白，可溶的话应该没问题，如果是从组织里提取的样品，需要知道是否结合在膜上。
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20楼2013-06-01 04:28:24
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