应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 碱性蛋白Native-PAGE
52/1返回列表
查看: 5511  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] 碱性蛋白Native-PAGE

现在老板让做蛋白的Native-PAGE，但是我们实验室之前没有人做这个，查资料又有好多地方不明白，不知道哪位大侠有这方面的经验，传授一下
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-05-14 09:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-27 00:49:43
单体是多大呢？BN-PAGE一般看不到分子量小的蛋白，一般可以看到多聚体或者是蛋白复合物。胶的配方和做法可以参考下面的文献。
Cline and Mori (2001) J Cell Biol 154:719-729...

单体的分子量在20-30kd
赞一下 回复此楼
11楼2013-05-27 08:32:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
飘零的叶子(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-14 10:59:47
native gel 顾名思义就是蛋白在胶上的迁移率除了受到分子量的影响还受到蛋白结构的影响。在配置蛋白ｎａｔｉｖｅ　ｇｅｌ的时候讲所有ｂｕｆｆｅｒ中的ＳＤＳ去除，且电泳液中也不能有ＳＤＳ，其次是蛋白ｌｏａｄｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒ　中也不能有ＳＤＳ，且上样之前不需要经过蒸煮变性步骤。最后电泳过程中稍注意一下电泳温度（一般建议冰浴跑）。
祝好你好运
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-14 10:14:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飘零的叶子: 金币+5 2013-05-25 15:33:31
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-05-25 21:50:05
你的蛋白的等电点是多少？普通的native-PAGE的样品、buffer里没有SDS，所以只能靠本身蛋白所带电荷跑，如果是碱性蛋白的话很可能根本不向正极跑。你需要跑在负极电泳缓冲液/样品中引入一些负电荷，比方说blue-native PAGE、hrCN-PAGE、Deriphat-PAGE。
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-15 08:32:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-15 08:32:40
你的蛋白的等电点是多少？普通的native-PAGE的样品、buffer里没有SDS，所以只能靠本身蛋白所带电荷跑，如果是碱性蛋白的话很可能根本不向正极跑。你需要跑在负极电泳缓冲液/样品中引入一些负电荷，比方说blue-nativ ...

您对非变性胶熟悉吗？我的蛋白的等电点都在8点多，用酸性非变性胶跑过了，但是没有什么条带。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-25 15:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭