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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, BioEPI+1, 感谢详细的回答 2013-05-13 09:01:48
jiantunyu: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-05-13 11:13:52

楼主！你用100Da 的透析袋透析什么？蛋白吗？你的透析袋里都有些什么？有有机物吗？有肌氨酸钠？有Triton X-100吗？你的透析buffer是什么？水吗？············你的问题问的·····诶！！！！！
关键原因在于：透析袋里面的渗透压大于外面！而你的透析袋体积又不够大！

你先要明白道尔顿是什么，他其实就是表示原子质量单位，在生物化学、分子生物学和蛋白组学中经常用D或KD，定义为碳12原子质量的1/12，1D＝1/N g，N为阿弗加德罗常数，其实最开始道尔顿计算出的原子量是我们现在用的当量.
分子量是没有单位的，它是相对分子质量，比值是固定的，用原子量算出来的。

比如你要透析掉的NaCl，它的分子量就是58.44Da！

但是你的透析袋是截留100Da分子量以上，例如假设你的要透析的样品中含有多种有机物质（分子量较大）！而你的透析buffer却是ddH2O,虽然NaCl是透析出来了！但是其中的有机物质呢！！！不还在里面吗，导致里面的渗透压比外面的大，为了平衡！水就不断进入透析袋中！直到膨胀不能在膨胀为止，有时还会透析袋破裂！

建议：
1. 因为你只脱盐！所以建议你在你的透析buffer中加入与你要透析的样品相同的溶剂（NaCL除外）！这样可以减小透析袋内外渗透压之差！
2.如果你已经保持你的透析buffer与你要透析的样品是相同的溶剂（NaCL除外），可能是盐浓度太高了！那么建议你再将透析袋的长度剪长一点，10cm试试！
3.透析不一定是换buffer的最好办法，你可以试一试脱盐柱G25，方面，快速！

就这么多吧，希望能给你点帮助！
建议你一下，下次问问题的时候，最好将问题阐述清楚，稀里糊涂的，别人没办法给你解答！

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3楼2013-05-12 11:43:56

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Dionysius

木虫 (小有名气)

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感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-05-13 09:02:25

在半透膜将纯液体与含有溶质的液体分开情况下，纯液体的化学势高于含有溶质的溶液的化学势，而物质移动规律是从化学势高移动到化学势低的，因此溶剂分子经半透膜移向另外一边的溶液。
用透析袋就是这样，透析袋内浓度较高，为了促使两边平衡，外面的水会进入透析袋内，里面的无机盐也会渗透到外面。但是氯化钠没有颜色，你看不出来而已。

2楼2013-05-12 11:05:07

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wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-05-13 09:02:45

问题不太大，透析袋没那么弱，下次不要用这个透析袋了，记得放长一点

4楼2013-05-12 20:07:28

美丽传说

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wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-05-13 09:02:54

这种现象很正常，可以用透析袋内外相同的溶液进行透析，就不会胀袋，或者你在磁力搅拌器上透析4h以上，胀袋应该没这么严重，或是透析后浓缩一下，能保证浓度

5楼2013-05-13 08:40:14

jiantunyu

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6楼2013-05-13 11:18:31

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你的蛋白体积多少？如果量大建议你用48ml的G25脱盐柱！

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7楼2013-05-13 11:37:37

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一般我们过分子筛蛋白的上样量是你柱体积的0.5%~5%！这个上样量具有较好的分离效果！

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8楼2013-05-13 12:14:26

jiantunyu

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9楼2013-05-13 12:39:07

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引用回帖:

9楼: Originally posted by jiantunyu at 2013-05-13 12:39:07
我不是蛋白，分子量很小，上了G25脱盐柱，基本分不开...

1KD的东西！能告诉我是什么吗？

1. 除盐对于浓度应该也是有一定的限制的，同样的样品盐浓度高的自然要比浓度低的要在柱子上走的峰要宽些，相对需要的柱子的分辨率也要高点，但是在正常的范围如1-2M应该影响不大，不过要除得很干净还是尽量少上点样品，上样的体积毕竟比浓度的影响更大。

2. 流速和柱体积都会影响你的脱盐效果！建议选择合适的流速！
建议选择更长的脱盐柱！

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10楼2013-05-13 13:00:21