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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » microRNA反转录方面的
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juliwang

新虫 (初入文坛)

[求助] microRNA反转录方面的

我现在在做microRNA方面的，首先在反转录这里出现问题了，我用的是颈环反转录引物，我想问的是microRNA反转录时是不是要用特定的反转录试剂盒呢？是不是普通的反转录试剂盒就不行呢?
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1楼 2013-05-11 15:59:42
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juliwang

新虫 (初入文坛)
我是先提取RNA，然后用特异性茎环引物反转录成cDNA，最后准备做定量，但是在反转录成cDNA后，进行普通的PCR验证怎么都扩增不出条带，连内参U6也扩不出来。是不是microRNA反转录需要特定的反转录试剂盒呢？我试验的材料用的是山羊。
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3楼2013-05-12 17:26:31
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
juliwang(gyesang代发): 金币+1, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-05-11 21:32:10
楼主把问题再描述详细一点吧, 出现的是什么问题? 你要做的是microRNA, 你也提到了颈环, 那么你究竟要检测pri-microRNA, 还是pre-microRNA, 还是成熟的miRNA?
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2楼2013-05-11 21:30:44
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不需要用特殊的试剂盒.
既然U6都没有出来, 楼主首先要看看你提的样品是否质量是好的?
其次, 虽然用的酶什么的没有特殊要求, 但是要注意反转录时候的程序是和一般反转录cDNA是不一样的(第一步的温度).
还有一点就是你订来的引物在使用之前也要做变性处理确保引物不形成二聚体.
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4楼2013-05-13 00:43:30
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893182481

新虫 (初入文坛)
楼主，我现在跟你之前做一样的实验，用的普通的反转录试剂盒，也是内参都出不来。你现在有什么好方法了吗？跪求~
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5楼2015-04-25 10:01:30
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