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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 毛状根 培养
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Bella0224

金虫 (小有名气)

[求助] 毛状根 培养

各位虫友好，依旧还是那个做毛状根死活做不出来的家伙。。。

这里很像问下各位，毛状根的培养，会不会出现假阳性？

我的根长出来的，可能形态上比较像毛状根，但会不会不是毛状根？（因为进行PCR鉴定，毛状根没有出现rolC基因，而农杆菌A4的阳性对照却在500bp有条带出现）

现在就觉得自己培养出来的毛状根是假的。。。第三张PCR的图片，亮带是我的阳性Ri质粒的对照，旁边就是我的毛状根，啥都木有。。。。。。

求助各位。。。。

P1000940.JPG



P1000986.JPG



1.png
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1楼 2013-05-09 09:39:08
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xuehongbai

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-26 03:40:54
1 你参考的是什么文献，有些中英文文献仅可参考不可尽信
2 R1601应该问题不大，可以诱导出毛根，但不同菌株对不同物种侵染效率不同，你应该首先确认你拥有的R1601曾被用于成功诱导别的植物
3 没有DNA条带，不一定 ...

参考的文献是《何首乌毛状根的诱导及其培养》，作者：王莉、于荣敏等，发现LBA9402 和R1601诱导的毛状根中，均有TR-DNA而，R1601诱导的毛状根中无TL-DNA，LBA9402中有。
rol-c的检测应该是TL-DNA中的基因，TL-DNA未转入植物中则诱导的毛状根无rol相应基因，且生长缓慢，因为单个的TR-DNA也可诱导毛状根，可能是毛状根中诱导常产生不同株系的原因。觉得这其中的原因也是可以讨论的问题？
以上只是理论上的解释，如果实验过程存在问题，那就另当别论
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dnf
11楼2013-05-26 11:12:30
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种问题以前我也遇到过，首先楼主可以检查毛根DNA提取，在PCR时可以考虑做个毛根的阳性对照（找个肯定能从毛根DNAP出来的，譬如植物某些保守基因）；其次，相较于正常根，毛根生长非常快速，没有向地性，而且在培养基中不需要外源的激素，不知道楼主的培养体系如何？最后，如果从生长状态上看是毛状根，但PCR始终不理想，如果条件允许，还可以通过薄层层析检测冠瘿碱来辅助判断。
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Bella0224
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2楼2013-05-09 16:14:20
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Bella0224

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-09 16:14:20
这种问题以前我也遇到过，首先楼主可以检查毛根DNA提取，在PCR时可以考虑做个毛根的阳性对照（找个肯定能从毛根DNAP出来的，譬如植物某些保守基因）；其次，相较于正常根，毛根生长非常快速，没有向地性，而且在培养 ...

请问薄层层析冠瘿碱是利用高压纸电泳么？因为文献上写的很模糊，我不是特别明白。。。
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3楼2013-05-10 10:02:44
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by Bella0224 at 2013-05-10 10:02:44
请问薄层层析冠瘿碱是利用高压纸电泳么？因为文献上写的很模糊，我不是特别明白。。。...

我以前遇到类似你的问题时，曾考虑做这个，但不用高压纸电泳，做药化的同学建议我用一般的薄层层析法。楼主还是先从DNA提取和PCR着手看看有什么问题，最后实在没法判断再考虑检测冠瘿碱。
楼主有没试着把毛根转导一般MS培养基上看它的生长情况？
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4楼2013-05-10 16:37:09
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