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杨洁儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 骨DNA检测

最近在做检测骨中DNA 的含量,但始终感觉没有检测出骨中DNA的真实含量,哪位专家可否帮忙分析一下?如有做过相关实验,可否告知具体的操作方法。虔诚感谢!
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fool_proof

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
杨洁儿(红舟流星代发): 金币+10, 代扣代发金币 2013-08-31 12:42:04
定量需要采用Picogreen试剂盒,还可以采用琼脂糖电泳,但是骨用蛋白酶K难于消化,数据总是偏低,需要想办法消化,采用EDTA脱钙可以一试。
渴望旅游
2楼2013-05-08 21:58:37
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杨洁儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-08 21:58:37
定量需要采用Picogreen试剂盒,还可以采用琼脂糖电泳,但是骨用蛋白酶K难于消化,数据总是偏低,需要想办法消化,采用EDTA脱钙可以一试。

我也是用的Picogreen试剂盒检测的,但是结果要么是检测不出来,要么是所测不同组之间没有什么差别。
除了采用蛋白酶K消化外,还能用什么消化呢?
3楼2013-05-09 09:39:25
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fool_proof

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 杨洁儿 at 2013-05-09 09:39:25
我也是用的Picogreen试剂盒检测的,但是结果要么是检测不出来,要么是所测不同组之间没有什么差别。
除了采用蛋白酶K消化外,还能用什么消化呢?...

中国药典有外源性DNA检测方法,可以参考这个,但是样品的消解都是采用蛋白酶K的,如果有其他酶能够消解样品也可以,消解不能影响DNA。骨材料最好先脱钙,再消解。
渴望旅游
4楼2013-05-09 11:42:01
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杨洁儿

新虫 (初入文坛)

内容已删除
5楼2013-05-09 12:06:12
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fool_proof

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
红舟流星: 金币+2, 应助指数+1, 欢迎来生物材料板块积极应助交流 2013-05-09 23:58:56
内容已删除

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渴望旅游
6楼2013-05-09 12:26:13
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杨洁儿

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-09 12:26:13
我自己没做过,让别人帮忙做过,没有脱钙,检测结果就是很低。盐酸脱钙对DNA会有影响的,最好用EDTA脱钙或者低浓度盐酸。另外,DNA的提取也很关键,磁珠法回收率高一些。...

你找的是哪个公司帮忙做的?
7楼2013-05-09 21:52:46
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fool_proof

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 杨洁儿 at 2013-05-09 21:52:46
你找的是哪个公司帮忙做的?...

我们单位的其他研究人员做的,不光做骨的,还做其他软组织
渴望旅游
8楼2013-05-10 08:27:49
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杨洁儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-10 08:27:49
我们单位的其他研究人员做的,不光做骨的,还做其他软组织...

哦,好的,谢谢!
9楼2013-05-10 09:08:15
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