应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助WB大师
151/2返回列表12下一页
查看: 1212  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

畅言||琪语

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助WB大师 已有5人参与

求助WB国手：我研一，做WB第一次显影蛋白分子量20 显影结果很清楚，就是背景很高。现在第二次重新提蛋白，重新上样电泳转膜恒流200mA 2小时  为什么显影不出结果啊。第三次同样什么都没有，但是每次β-actin 显影出来结果都很好。。。难道我连续两次没孵上抗体？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2013-05-07 20:59:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feixiang1209

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-08 02:07:37
转膜转过了，下次可以试试少转一会，蛋白本身就小，时间2小时太长了
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-07 21:02:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

畅言||琪语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by feixiang1209 at 2013-05-07 21:02:33
转膜转过了，下次可以试试少转一会，蛋白本身就小，时间2小时太长了

我第一次做是100V 2h  显影量特别多，只是换了台机子，我就恒流了 。我应该继续恒压。2好 可以不
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-07 21:06:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feixiang1209

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 畅言||琪语 at 2013-05-07 21:06:12
我第一次做是100V 2h  显影量特别多，只是换了台机子，我就恒流了 。我应该继续恒压。2好 可以不...

100v?????你确定？？？？是半干转膜还湿转啊？
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-07 21:27:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

畅言||琪语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by feixiang1209 at 2013-05-07 21:27:53
100v?????你确定？？？？是半干转膜还湿转啊？...

湿转 100V  我确定 我们这边实验室都这样的
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-07 22:06:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feixiang1209

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 畅言||琪语 at 2013-05-07 22:06:32
湿转 100V  我确定 我们这边实验室都这样的...

哦 我只做过半干的  不过你这种情况很有可能使因为转过了
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-07 22:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emosgaogao

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-08 02:08:03
100V湿转应该没问题，我们实验室也是这个实验条件，所以重新提取的蛋白和抗体的影响应该大些，建议楼主还是新配抗体尝试下，同时对于20KD左右的蛋白用12%或者15%的PAGE胶。
赞一下 回复此楼
忍得住诱惑，耐得住寂寞
7楼2013-05-07 23:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

畅言||琪语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by emosgaogao at 2013-05-07 23:27:49
100V湿转应该没问题，我们实验室也是这个实验条件，所以重新提取的蛋白和抗体的影响应该大些，建议楼主还是新配抗体尝试下，同时对于20KD左右的蛋白用12%或者15%的PAGE胶。

我是用12%的PAGE胶 也试过重新用新抗体但是还是没结果    今天换了一个新二抗  看能不能出结果
赞一下 回复此楼
8楼2013-05-08 19:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

churchill87426

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不知道LZ用多大孔径的膜？最好用0.2uM的膜。不然有可能转过。
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-08 19:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

畅言||琪语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by churchill87426 at 2013-05-08 19:34:15
不知道LZ用多大孔径的膜？最好用0.2uM的膜。不然有可能转过。

刚好用大于等于 20KD 的膜     但是上次也是用这个膜 的啊
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-08 20:15:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 畅言||琪语 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 12/600 2026-08-12 01:27 by 南京中西医
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 9/450 2026-08-11 22:12 by 医学老男孩
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +3 工厂打螺丝 2026-08-08 3/150 2026-08-11 13:42 by 会议编辑
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭