24小时热门版块排行榜    

查看: 1221  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

畅言||琪语

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助WB大师 已有5人参与

求助WB国手:我研一,做WB第一次显影蛋白分子量20 显影结果很清楚,就是背景很高。现在第二次重新提蛋白,重新上样电泳转膜恒流200mA 2小时  为什么显影不出结果啊。第三次同样什么都没有,但是每次β-actin 显影出来结果都很好。。。难道我连续两次没孵上抗体?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emosgaogao

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2013-05-08 02:08:03
100V湿转应该没问题,我们实验室也是这个实验条件,所以重新提取的蛋白和抗体的影响应该大些,建议楼主还是新配抗体尝试下,同时对于20KD左右的蛋白用12%或者15%的PAGE胶。
忍得住诱惑,耐得住寂寞
7楼2013-05-07 23:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

feixiang1209

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-08 02:07:37
转膜转过了,下次可以试试少转一会,蛋白本身就小,时间2小时太长了
2楼2013-05-07 21:02:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

畅言||琪语

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by feixiang1209 at 2013-05-07 21:02:33
转膜转过了,下次可以试试少转一会,蛋白本身就小,时间2小时太长了

我第一次做是100V 2h  显影量特别多,只是换了台机子,我就恒流了 。我应该继续恒压。2好 可以不
3楼2013-05-07 21:06:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feixiang1209

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 畅言||琪语 at 2013-05-07 21:06:12
我第一次做是100V 2h  显影量特别多,只是换了台机子,我就恒流了 。我应该继续恒压。2好 可以不...

100v?????你确定????是半干转膜还湿转啊?
4楼2013-05-07 21:27:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 静等基金结果 +6 gjjjzhong 2026-08-10 18/900 2026-08-13 17:25 by JACS/Angew
[文学芳草园] 阿姨 +3 汪汪锅 2026-08-09 3/150 2026-08-13 16:56 by 410610288
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +5 医学老男孩 2026-08-13 11/550 2026-08-13 15:41 by sdfapple719
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
信息提示
请填处理意见