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emosgaogao

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 畅言||琪语 at 2013-05-08 19:11:02
我是用12%的PAGE胶 也试过重新用新抗体但是还是没结果    今天换了一个新二抗  看能不能出结果...

这么想来应该问题不大,最坏的影响是水质太差影响了western,笑~楼主换个新的二抗,最好同时点个阳性对照,这样更好分析~
忍得住诱惑,耐得住寂寞
11楼2013-05-08 20:19:25
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emosgaogao

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 畅言||琪语 at 2013-05-08 19:11:02
我是用12%的PAGE胶 也试过重新用新抗体但是还是没结果    今天换了一个新二抗  看能不能出结果...

LZ最好能同时点一个阳性对照,这样可以分析是否是抗体引起的,转膜效果从最小的maker片段是否能清晰的呈现来初步判断。
祝你好运~
忍得住诱惑,耐得住寂寞
12楼2013-05-08 20:23:42
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lofty23

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

13楼2013-05-09 00:45:12
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houchm0927

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
先说我自己做过的,检测的是植物蛋白,28kD左右,湿法转膜200mA恒流2h,没问题。倒是试过只转1.5h,当时结果是SDS-PAGE胶上都还残有显色marker,所以一直2h。个人觉得楼主转膜参数没问题。
我觉得WB没结果原因挺多的。取样时蛋白制备是否有问题,需要楼主确定下;转膜成功与否可以丽春红染色看下;第一次结果是否可靠,背景很高会不会是假阳性;一抗二抗来源,是否匹配(实验室有个老师最开都买错二抗了,汗);一抗孵育过程有问题吗,时间、温度、方式,actin做得出来说明二抗孵育应该没问题。
个人觉得WB自转膜后,后续步骤挺难监测的,造成问题的原因很多,实验除了严谨细致,确保每一步行之有理,还要靠运气的。
楼主好运

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

14楼2013-05-10 01:02:35
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畅言||琪语

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by houchm0927 at 2013-05-10 01:02:35
先说我自己做过的,检测的是植物蛋白,28kD左右,湿法转膜200mA恒流2h,没问题。倒是试过只转1.5h,当时结果是SDS-PAGE胶上都还残有显色marker,所以一直2h。个人觉得楼主转膜参数没问题。
我觉得WB没结果原因挺多 ...

好吧  懂了~~~
15楼2013-05-12 18:27:50
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