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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因敲除后遇到很怪的现象，求解释。谢谢！
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rivergf

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因敲除后遇到很怪的现象，求解释。谢谢！

我的菌株基因组存在两种酶，分别为A酶、B酶。
1、B酶有两个拷贝，记作B1、B2
2、A酶与B1酶的阅读框紧邻，但A酶的阅读框处于反义链，B1酶处于正义链，B2的阅读框离B1相距1000多个阅读框。

3、A、B酶分别催化的反应如下：
A酶将底物E转化为F、G、H；
B酶以F为底物，将其转化为E。

4、当单独敲除B1时，发现A大幅上调；
当单独敲除B2时，发现A基本不上调；
当同时敲除B1、B2时，发现A大幅上调，幅度略低于单独敲除B1时。
5、我认为A与B1紧邻，可能存在一定的互作。导致单独敲除B2时，A没有上调。请问有没有谁看到过类似的文献，或者有更好的解释。
敬请赐教，或推荐类似研究文献！
谢谢！

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生活、目标、信仰、改变。。。
1楼 2013-05-04 11:29:37
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renzhiq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析，以后常来 2013-05-06 08:32:18
我个人觉得，你应该考察一下单敲除B1和B2是，该菌株将F转化为E的能力，我觉得你可能会得出这样的结果，单敲B2，活力影响不大。单敲B1，该菌将F转化为E的能力大幅度下降。
主要是牛给的信息不是很全，不能给你进一步分析，如果结果如上所述就会很好解释……
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2楼2013-05-04 23:37:45
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137167741

至尊木虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 应助指数-1, 谢谢参与，不过回帖更倾向于交流，而不是应助 2013-05-06 08:32:29
我想问一下，你基因敲除是采用什么方法做的？
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总有一天我要修改用户名。
3楼2013-05-05 08:04:36
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rivergf

铜虫 (小有名气)
内容已删除
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生活、目标、信仰、改变。。。
4楼2013-05-05 09:57:01
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rivergf

铜虫 (小有名气)
内容已删除
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生活、目标、信仰、改变。。。
5楼2013-05-05 09:57:42
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你说的类似“A上调”是指酶活性吧？
还有根据物质守恒， 你给的2个方程式不守恒啊，G+H从哪里来？
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6楼2013-05-06 08:31:50
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qiuqu_200212

至尊木虫 (知名作家)

无助又无奈
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币-2, 应助指数-1, 请不要刷应助指数，楼主已经说了B1,B2基因分别被单独敲除和一起敲除 2013-05-07 08:16:15
一个一个的敲除看看，究竟有些啥影响。
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无奈又无助的天鹅，孤零零
7楼2013-05-06 09:12:21
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rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wizardfan at 2013-05-06 08:31:50
你说的类似“A上调”是指酶活性吧？
还有根据物质守恒， 你给的2个方程式不守恒啊，G+H从哪里来？

A上调是指RNA表达量上调。

我列出的是这两个酶催化的反应，生物体内肯定还有一系列的其他反应。
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生活、目标、信仰、改变。。。
8楼2013-05-09 09:35:13
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rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by qiuqu_200212 at 2013-05-06 09:12:21
一个一个的敲除看看，究竟有些啥影响。

我现在再写毕业论文了。。。。。
希望能解释清楚！
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生活、目标、信仰、改变。。。
9楼2013-05-09 09:35:41
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-05-09 19:43:58
我认为还是从反式因子角度考虑可能会有突破，你可以检测不同的敲除情况下对于A，B1，B2的启动子区域的特定的结合蛋白质是否有所不同？这步只要做个凝胶阻滞电泳或足迹法就行。
如果这种方法检测不出来，那就要考虑蛋白质-蛋白质相互作用了，可以用不同的荧光蛋白标记不同的蛋白质，然后用荧光显微镜观测不同的敲除状况下的与转录因子相互作用的反式因子。
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10楼2013-05-09 12:01:07
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