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rivergf

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 814081
注册: 2009-07-22
性别: GG
专业: 环境微生物学

[求助] 基因敲除后遇到很怪的现象，求解释。谢谢！

我的菌株基因组存在两种酶，分别为A酶、B酶。
1、B酶有两个拷贝，记作B1、B2
2、A酶与B1酶的阅读框紧邻，但A酶的阅读框处于反义链，B1酶处于正义链，B2的阅读框离B1相距1000多个阅读框。

3、A、B酶分别催化的反应如下：
A酶将底物E转化为F、G、H；
B酶以F为底物，将其转化为E。

4、当单独敲除B1时，发现A大幅上调；
当单独敲除B2时，发现A基本不上调；
当同时敲除B1、B2时，发现A大幅上调，幅度略低于单独敲除B1时。
5、我认为A与B1紧邻，可能存在一定的互作。导致单独敲除B2时，A没有上调。请问有没有谁看到过类似的文献，或者有更好的解释。
敬请赐教，或推荐类似研究文献！
谢谢！

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生活、目标、信仰、改变。。。

1楼 2013-05-04 11:29:37

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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注册: 2012-04-19
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学综合

【答案】应助回帖

★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-05-09 19:43:58

我认为还是从反式因子角度考虑可能会有突破，你可以检测不同的敲除情况下对于A，B1，B2的启动子区域的特定的结合蛋白质是否有所不同？这步只要做个凝胶阻滞电泳或足迹法就行。
如果这种方法检测不出来，那就要考虑蛋白质-蛋白质相互作用了，可以用不同的荧光蛋白标记不同的蛋白质，然后用荧光显微镜观测不同的敲除状况下的与转录因子相互作用的反式因子。