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LWZtoever

金虫 (小有名气)

[求助] 免疫组化阳性对照也显示阴性 头疼

前面做了几天标本染色 都阴性 于是按照说明书找出阳性对照的组织 结果还是阴性 隐隐约约有弱阳性 求帮助

抗原修复用的解冻档,5分钟2次
TRIS-EDTA PH7.5
缓冲液用的TBS PH7.2。

一抗已经买来3月多了, 浓缩抗体,在4度冰箱中储存
稀释液用的TBS。

二抗是光谱的 应该没有问题

步骤顺序无差错
求提示!
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流玥

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
LWZtoever(寻梦五世代发): 金币+1, 感谢应助 2013-05-07 12:08:14
还是怀疑抗体除了问题。一抗出问题的可能性大些~~~
选取的阳性组织取样有没有问题?
3楼2013-05-07 00:14:58
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kinner.huang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
LWZtoever(侯伯杨代发): 金币+1, 谢谢回帖应助 2013-05-05 22:26:32
所有标本有阳性的吗?
如果步骤没有错误,主要考虑抗体的问题,试验过二抗工作的话,就是一抗的问题。强烈怀疑一抗!我之前就遇到过这样的情况,前后换了三次抗体。还有一个要考虑抗体稀释浓度问题。
2楼2013-05-05 19:37:13
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LWZtoever

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kinner.huang at 2013-05-05 19:37:13
所有标本有阳性的吗?
如果步骤没有错误,主要考虑抗体的问题,试验过二抗工作的话,就是一抗的问题。强烈怀疑一抗!我之前就遇到过这样的情况,前后换了三次抗体。还有一个要考虑抗体稀释浓度问题。

后来增加了抗原修复强度 阳性对照就很明显是阳性的了 看来一抗没有问题 但是肿瘤标本依然全阴性结果 除了在肿瘤中抗原不表达 还有没有其他实验的失误可以解释这种情况呢?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-05-08 08:21:03
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LWZtoever

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 流玥 at 2013-05-07 00:14:58
还是怀疑抗体除了问题。一抗出问题的可能性大些~~~
选取的阳性组织取样有没有问题?

阳性对照后来抗原修复修正后做出来了。但是在肿瘤标本中依然全阴性,不符合文献中所说的10/100-15/100,不知道还有没有可以调整的步骤?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-05-08 08:22:57
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