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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 免疫组化阳性对照也显示阴性 头疼
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LWZtoever

金虫 (小有名气)

[求助] 免疫组化阳性对照也显示阴性 头疼

前面做了几天标本染色 都阴性 于是按照说明书找出阳性对照的组织 结果还是阴性 隐隐约约有弱阳性 求帮助

抗原修复用的解冻档，5分钟2次
TRIS-EDTA PH7.5
缓冲液用的TBS PH7.2。

一抗已经买来3月多了， 浓缩抗体，在4度冰箱中储存
稀释液用的TBS。

二抗是光谱的 应该没有问题

步骤顺序无差错
求提示！
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1楼 2013-05-04 07:25:48
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流玥

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
LWZtoever(寻梦五世代发): 金币+1, 感谢应助 2013-05-07 12:08:14
还是怀疑抗体除了问题。一抗出问题的可能性大些~~~
选取的阳性组织取样有没有问题？
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3楼2013-05-07 00:14:58
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kinner.huang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
LWZtoever(侯伯杨代发): 金币+1, 谢谢回帖应助 2013-05-05 22:26:32
所有标本有阳性的吗？
如果步骤没有错误，主要考虑抗体的问题，试验过二抗工作的话，就是一抗的问题。强烈怀疑一抗！我之前就遇到过这样的情况，前后换了三次抗体。还有一个要考虑抗体稀释浓度问题。
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2楼2013-05-05 19:37:13
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LWZtoever

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kinner.huang at 2013-05-05 19:37:13
所有标本有阳性的吗？
如果步骤没有错误，主要考虑抗体的问题，试验过二抗工作的话，就是一抗的问题。强烈怀疑一抗！我之前就遇到过这样的情况，前后换了三次抗体。还有一个要考虑抗体稀释浓度问题。

后来增加了抗原修复强度 阳性对照就很明显是阳性的了 看来一抗没有问题 但是肿瘤标本依然全阴性结果 除了在肿瘤中抗原不表达 还有没有其他实验的失误可以解释这种情况呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-05-08 08:21:03
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LWZtoever

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 流玥 at 2013-05-07 00:14:58
还是怀疑抗体除了问题。一抗出问题的可能性大些~~~
选取的阳性组织取样有没有问题？

阳性对照后来抗原修复修正后做出来了。但是在肿瘤标本中依然全阴性，不符合文献中所说的10/100-15/100，不知道还有没有可以调整的步骤？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-05-08 08:22:57
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