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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 免疫组化阳性对照也显示阴性 头疼
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LWZtoever

金虫 (小有名气)

[求助] 免疫组化阳性对照也显示阴性 头疼

前面做了几天标本染色 都阴性 于是按照说明书找出阳性对照的组织 结果还是阴性 隐隐约约有弱阳性 求帮助

抗原修复用的解冻档，5分钟2次
TRIS-EDTA PH7.5
缓冲液用的TBS PH7.2。

一抗已经买来3月多了， 浓缩抗体，在4度冰箱中储存
稀释液用的TBS。

二抗是光谱的 应该没有问题

步骤顺序无差错
求提示！
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1楼 2013-05-04 07:25:48
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kinner.huang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
LWZtoever(侯伯杨代发): 金币+1, 谢谢回帖应助 2013-05-05 22:26:32
所有标本有阳性的吗？
如果步骤没有错误，主要考虑抗体的问题，试验过二抗工作的话，就是一抗的问题。强烈怀疑一抗！我之前就遇到过这样的情况，前后换了三次抗体。还有一个要考虑抗体稀释浓度问题。
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2楼2013-05-05 19:37:13
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流玥

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
LWZtoever(寻梦五世代发): 金币+1, 感谢应助 2013-05-07 12:08:14
还是怀疑抗体除了问题。一抗出问题的可能性大些~~~
选取的阳性组织取样有没有问题？
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3楼2013-05-07 00:14:58
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LWZtoever

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kinner.huang at 2013-05-05 19:37:13
所有标本有阳性的吗？
如果步骤没有错误，主要考虑抗体的问题，试验过二抗工作的话，就是一抗的问题。强烈怀疑一抗！我之前就遇到过这样的情况，前后换了三次抗体。还有一个要考虑抗体稀释浓度问题。

后来增加了抗原修复强度 阳性对照就很明显是阳性的了 看来一抗没有问题 但是肿瘤标本依然全阴性结果 除了在肿瘤中抗原不表达 还有没有其他实验的失误可以解释这种情况呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-05-08 08:21:03
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LWZtoever

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 流玥 at 2013-05-07 00:14:58
还是怀疑抗体除了问题。一抗出问题的可能性大些~~~
选取的阳性组织取样有没有问题？

阳性对照后来抗原修复修正后做出来了。但是在肿瘤标本中依然全阴性，不符合文献中所说的10/100-15/100，不知道还有没有可以调整的步骤？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-05-08 08:22:57
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kinner.huang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by LWZtoever at 2013-05-08 08:21:03
后来增加了抗原修复强度 阳性对照就很明显是阳性的了 看来一抗没有问题 但是肿瘤标本依然全阴性结果 除了在肿瘤中抗原不表达 还有没有其他实验的失误可以解释这种情况呢？
...

增加抗体浓度 试试？
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6楼2013-05-08 15:31:11
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
LWZtoever(侯伯杨代发): 金币+1, 谢谢应助 2013-05-20 22:56:17
如果你的阳性和阴性对照结果都很可靠的话，说明你的实验试剂和方法都是没有问题的，看起来你的目的蛋白在肿瘤组织中的表达率并不高，会不会是标本选取或者取材的原因，建议先切片HE染色确定肿瘤部位，再选取肿瘤部位切片染色。
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实验，实验，还是实验！
7楼2013-05-09 03:17:50
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chenghairong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
LWZtoever(侯伯杨代发): 金币+1, 谢谢应助 2013-05-20 22:57:04
缩++影: 应助指数+1 2013-05-21 00:34:11
LWZtoever: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-31 12:19:41
觉得还是肿瘤组织切片的问题，先试染一张S100 （确定是肿瘤组织的抗体）如果阳性就排除了切片的问题，可能是抗体浓度的问题或者洗片子时间太长了
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8楼2013-05-20 22:20:57
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jzd78

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
缩++影: 金币+1, 鼓励交流 2013-05-21 00:34:29
首先要排除标本会不会没有肿瘤细胞，如果排除标本问题，那可能是实验方法、步骤或者试剂有问题……
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人生三境界:昨夜西风凋碧树。独上高楼，望尽天涯路。衣带渐宽终不悔，为伊消得人憔悴。众里寻他千百度...
9楼2013-05-21 00:05:26
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yuantuantuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jzd78 at 2013-05-21 00:05:26
首先要排除标本会不会没有肿瘤细胞，如果排除标本问题，那可能是实验方法、步骤或者试剂有问题……

请问，查文献上说标本中阳性表达是深棕色或深黄色，那怎么判断是不是非特异性染色呢？多谢啦
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10楼2015-04-09 15:55:31
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