应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 免疫组化阳性对照也显示阴性 头疼
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 2397  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

LWZtoever

金虫 (小有名气)

[求助] 免疫组化阳性对照也显示阴性 头疼

前面做了几天标本染色 都阴性 于是按照说明书找出阳性对照的组织 结果还是阴性 隐隐约约有弱阳性 求帮助

抗原修复用的解冻档，5分钟2次
TRIS-EDTA PH7.5
缓冲液用的TBS PH7.2。

一抗已经买来3月多了， 浓缩抗体，在4度冰箱中储存
稀释液用的TBS。

二抗是光谱的 应该没有问题

步骤顺序无差错
求提示！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-05-04 07:25:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kinner.huang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
LWZtoever(侯伯杨代发): 金币+1, 谢谢回帖应助 2013-05-05 22:26:32
所有标本有阳性的吗？
如果步骤没有错误，主要考虑抗体的问题，试验过二抗工作的话，就是一抗的问题。强烈怀疑一抗！我之前就遇到过这样的情况，前后换了三次抗体。还有一个要考虑抗体稀释浓度问题。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-05 19:37:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流玥

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
LWZtoever(寻梦五世代发): 金币+1, 感谢应助 2013-05-07 12:08:14
还是怀疑抗体除了问题。一抗出问题的可能性大些~~~
选取的阳性组织取样有没有问题？
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-07 00:14:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LWZtoever

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kinner.huang at 2013-05-05 19:37:13
所有标本有阳性的吗？
如果步骤没有错误，主要考虑抗体的问题，试验过二抗工作的话，就是一抗的问题。强烈怀疑一抗！我之前就遇到过这样的情况，前后换了三次抗体。还有一个要考虑抗体稀释浓度问题。

后来增加了抗原修复强度 阳性对照就很明显是阳性的了 看来一抗没有问题 但是肿瘤标本依然全阴性结果 除了在肿瘤中抗原不表达 还有没有其他实验的失误可以解释这种情况呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-08 08:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LWZtoever

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 流玥 at 2013-05-07 00:14:58
还是怀疑抗体除了问题。一抗出问题的可能性大些~~~
选取的阳性组织取样有没有问题？

阳性对照后来抗原修复修正后做出来了。但是在肿瘤标本中依然全阴性，不符合文献中所说的10/100-15/100，不知道还有没有可以调整的步骤？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-08 08:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kinner.huang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by LWZtoever at 2013-05-08 08:21:03
后来增加了抗原修复强度 阳性对照就很明显是阳性的了 看来一抗没有问题 但是肿瘤标本依然全阴性结果 除了在肿瘤中抗原不表达 还有没有其他实验的失误可以解释这种情况呢？
...

增加抗体浓度 试试？
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-08 15:31:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
LWZtoever(侯伯杨代发): 金币+1, 谢谢应助 2013-05-20 22:56:17
如果你的阳性和阴性对照结果都很可靠的话，说明你的实验试剂和方法都是没有问题的，看起来你的目的蛋白在肿瘤组织中的表达率并不高，会不会是标本选取或者取材的原因，建议先切片HE染色确定肿瘤部位，再选取肿瘤部位切片染色。
赞一下 回复此楼
实验，实验，还是实验！
7楼2013-05-09 03:17:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenghairong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
LWZtoever(侯伯杨代发): 金币+1, 谢谢应助 2013-05-20 22:57:04
缩++影: 应助指数+1 2013-05-21 00:34:11
LWZtoever: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-31 12:19:41
觉得还是肿瘤组织切片的问题，先试染一张S100 （确定是肿瘤组织的抗体）如果阳性就排除了切片的问题，可能是抗体浓度的问题或者洗片子时间太长了
赞一下 回复此楼
8楼2013-05-20 22:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jzd78

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
缩++影: 金币+1, 鼓励交流 2013-05-21 00:34:29
首先要排除标本会不会没有肿瘤细胞，如果排除标本问题，那可能是实验方法、步骤或者试剂有问题……
赞一下 回复此楼
人生三境界:昨夜西风凋碧树。独上高楼，望尽天涯路。衣带渐宽终不悔，为伊消得人憔悴。众里寻他千百度...
9楼2013-05-21 00:05:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuantuantuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jzd78 at 2013-05-21 00:05:26
首先要排除标本会不会没有肿瘤细胞，如果排除标本问题，那可能是实验方法、步骤或者试剂有问题……

请问，查文献上说标本中阳性表达是深棕色或深黄色，那怎么判断是不是非特异性染色呢？多谢啦
赞一下 回复此楼
10楼2015-04-09 15:55:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 LWZtoever 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +8 张zic 2026-04-05 9/450 2026-04-06 13:03 by 猪会飞
[考研] 0703总分331求调剂 +10 ZY-05 2026-04-04 14/700 2026-04-06 11:51 by xhai2011
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +4 rious 2026-04-05 4/200 2026-04-06 11:08 by 静静静静静静静�
[考研] 调剂 一志愿吉林大学357分 +5 .Starry. 2026-04-04 5/250 2026-04-06 09:28 by cql1109
[考研] 求调剂 +11 熊二想上岸 2026-04-04 11/550 2026-04-05 22:21 by 醉翁wl
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 304求调剂（085602，过四级，一志愿985） +15 化工人999 2026-04-04 15/750 2026-04-05 16:25 by 我是电风扇r
[考研] 283分求调剂 +9 试试看呗 2026-04-04 9/450 2026-04-05 10:27 by 果冻大王
[考研] 调剂 +9 19945159693 2026-04-03 10/500 2026-04-04 20:16 by dongzh2009
[考研] 292求调剂 +11 2022080213 2026-04-04 13/650 2026-04-04 18:38 by macy2011
[考研] 266求调剂 +3 08电气工程 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:05 by 1753564080
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 调剂 +3 osbbx 2026-04-02 3/150 2026-04-03 07:47 by cc8418
[考研] 26考研调剂 +4 Wnz.20030617 2026-04-01 5/250 2026-04-02 16:11 by 1939136013狗壮
[考研] 318求调剂 +3 笃行致远. 2026-03-31 4/200 2026-04-02 15:56 by Jaylen.
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:49 by liumengping
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +8 cs0106 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:36 by 不吃魚的貓
[考研] 326求调剂 +4 崽崽仔 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:58 by 我的船我的海
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭