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蛋白质N-端/C-端测序：基于de novo sequencing，准确、快速、高效！
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蛋白质N-端/C-端测序：基于de novo sequencing，准确、快速、高效！ 蛋白质N-端/C-端序列组成影响蛋白质生物学功能，比如蛋白质的半衰期、蛋白亚细胞器定位等。对蛋白N-端/C-端测序的分析，有助于分析蛋白质的结构，了解蛋白质的生物学功能。 在分析表达纯化后的蛋白产物（特别是蛋白品）的过程中，需要对蛋白的末端进行验证，以保证表达纯化产物的N-端和C-端序列的准确性。蛋白翻译后在细胞内会发生剪切和修饰，通常不能简单地依据基因序列对蛋白质N-端/C-端序列进行预测，因此需要对蛋白质的氨基酸序列直接测序。 Edman降解法（Edman degradation）是蛋白的N-端序列分析中一种常见的方法，由埃德曼（P．Edman）在上世纪50年代所创立，是一种测定蛋白质一级结构的方法，主要是从蛋白质或多肽氨基末端进行分析。 基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质或多肽的N-端残基的偶联、苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解以及噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质或多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离氨基酸进行下一个Edman降解，然后通过HPLC对转化的PTH-氨基酸进行种类鉴定，最终实现蛋白质N-端序列的测定。 蛋白质C-端序列测定方法中，羧肽酶水解法应用最为广泛。羧肽酶是一类肽链外切酶，能够专一地从肽链的C-端逐个水解氨基酸基团，从而释放出游离的氨基酸。被释放的氨基酸数目与种类随反应时间而变化，根据释放的氨基酸量（摩尔数）与反应时间的关系，鉴定出氨基酸种类，从而得知C-端氨基酸序列。 Edman降解法蛋白质N-端测序和羧肽酶水解法蛋白质C-端测序虽然被广泛应用，但是它们存在一些局限性：无法解决N-端封闭的测序问题（环化、封闭）；被修饰的蛋白不能给出确切的信号；序列中含有太多非标准氨基酸，由于没有相应的标准品，无法鉴定氨基酸种类。 • 质谱法测定蛋白序列 •随着质谱技术的发展，质谱法被应用于蛋白质氨基酸序列的测定。 百蓁生物基于de novo sequencing（蛋白质从头测序），从蛋白质谱图中直接解析出N-端/C-端氨基酸序列。de novo sequencing技术优势： （1）不依赖于已知肽段序列数据库，从头测定未知肽段的氨基酸序列； （2）不受N-端封闭的限制，能对侧链基团翻译后加工或化学修饰进行定位； （3）可以对非标准氨基酸进行鉴定； （4）提高了检测灵敏度。 • 蛋白质N-端/C-端测序服务 •百蓁生物提供de novo sequencing蛋白质N-端/C-端测序服务： ·样品要求：蛋白质/多肽，纯度90%以上，20ug，液态/干粉； ·报告内容：提供全面、专业的英文测序报告，保证序列100%准确； ·服务周期：7个工作日出具交流版报告，根据客户的反馈时间出具正式报告； ·加急服务周期：5个工作日，费用+20%； ·特急服务周期：3个工作日，费用+100%。  百蓁生物 蛋白质N-端/C-端测序结果示例  |
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