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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 关于硅胶柱层析
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仙剑问情1203

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于硅胶柱层析

各位大侠们，帮帮忙啊，我最近在做蛙皮中甾体部分分离的试验，我是湿法上样的，样品是深黄色的，我打算用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脱，可是已经冲了一个梯度了，样品的那个黄色还在最上面，就下来了大约3厘米吧，这正常吗？是不是所有梯度都洗脱完，黄色才能跑到最下面啊？还是其他原因？还有洗脱剂的体积怎么算的啊？
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越努力，越幸运
1楼 2013-05-03 14:34:05
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wm0629

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 3Q 2013-05-03 23:21:41
仙剑问情1203: 金币+2 2013-05-05 09:55:52
很正常啊，如果你只想要那个黄色的部分，可能是你给的极性不够，换个极性稍大一点的梯度走一下试试。不过梯度换的跨度不要太大，一是容易分不开，把别的东西一起洗下来。用石油醚乙酸乙酯走，样品的极性应该很小吧。你初始流动相是多少啊？
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艰难困苦，玉汝于成。
2楼2013-05-03 17:45:46
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2013-05-03 23:22:01
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3楼2013-05-03 18:49:47
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wangzm111

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2013-05-03 23:22:11
仙剑问情1203: 金币+2 2013-05-05 09:56:15
甾体物质极性大，过硅胶柱时可以先把硅胶加点水失活，或者在流动相中加一定少量的水。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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有好心态才能有好状态
4楼2013-05-03 19:35:46
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顺风顺水

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangzm111 at 2013-05-03 19:35:46
甾体物质极性大，过硅胶柱时可以先把硅胶加点水失活，或者在流动相中加一定少量的水。

同意此楼说法，流动相没有选择有点问题，极性不够，可以调整流动相。如果是梯度洗脱的话，开始走的慢也正常，换梯度再洗
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5楼2013-05-04 07:22:00
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仙剑问情1203

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wm0629 at 2013-05-03 17:45:46
很正常啊，如果你只想要那个黄色的部分，可能是你给的极性不够，换个极性稍大一点的梯度走一下试试。不过梯度换的跨度不要太大，一是容易分不开，把别的东西一起洗下来。用石油醚乙酸乙酯走，样品的极性应该很小吧。 ...

我的初始流动相是石油醚和乙酸乙酯5：1，接下来是3：1，1：1，1：3，1：5，现在第二个梯度要冲完了，可是那个黄色的一直没怎么往下走，而且我把第一个梯度接的馏分跑了个薄层板子，几乎没什么东西，不知道是不是流动相不合适啊。
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越努力，越幸运
6楼2013-05-04 19:56:27
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wm0629

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
仙剑问情1203: 金币+1 2013-05-05 09:56:40
引用回帖:
6楼: Originally posted by 仙剑问情1203 at 2013-05-04 19:56:27
我的初始流动相是石油醚和乙酸乙酯5：1，接下来是3：1，1：1，1：3，1：5，现在第二个梯度要冲完了，可是那个黄色的一直没怎么往下走，而且我把第一个梯度接的馏分跑了个薄层板子，几乎没什么东西，不知道是不是流 ...

应该是极性不够吧，你再换个大点的极性走走试试。
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艰难困苦，玉汝于成。
7楼2013-05-04 20:39:52
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gslzzhixin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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仙剑问情1203: 金币+1 2013-05-05 09:56:46
楼上说的对，加大极性继续洗脱。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2013-05-05 09:11:14
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tandongxing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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仙剑问情1203: 金币+2 2013-05-06 09:30:33
这个就是你的洗脱机极性不够大了，你的增加极性，不过这个洗脱机极性你得事先用薄层摸好了，在你要的没出来之前，可以用极性小的冲冲杂质，你的那个黄色的色带应该很容易跑纯的，多练习练习，就会掌握很多经验
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旭日东升
9楼2013-05-05 09:57:12
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仙剑问情1203

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by tandongxing at 2013-05-05 09:57:12
这个就是你的洗脱机极性不够大了，你的增加极性，不过这个洗脱机极性你得事先用薄层摸好了，在你要的没出来之前，可以用极性小的冲冲杂质，你的那个黄色的色带应该很容易跑纯的，多练习练习，就会掌握很多经验

谢谢，现在跑下来东西了，但是一检测上面一个点，下面一条带状，像这样的话，是不是很难分出单体啊，我的目的就是分出单体啊
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越努力，越幸运
10楼2013-05-06 10:21:46
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