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仙剑问情1203

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于硅胶柱层析

各位大侠们,帮帮忙啊,我最近在做蛙皮中甾体部分分离的试验,我是湿法上样的,样品是深黄色的,我打算用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脱,可是已经冲了一个梯度了,样品的那个黄色还在最上面,就下来了大约3厘米吧,这正常吗?是不是所有梯度都洗脱完,黄色才能跑到最下面啊?还是其他原因?还有洗脱剂的体积怎么算的啊?
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越努力,越幸运
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wm0629

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 3Q 2013-05-03 23:21:41
仙剑问情1203: 金币+2 2013-05-05 09:55:52
很正常啊,如果你只想要那个黄色的部分,可能是你给的极性不够,换个极性稍大一点的梯度走一下试试。不过梯度换的跨度不要太大,一是容易分不开,把别的东西一起洗下来。用石油醚乙酸乙酯走,样品的极性应该很小吧。你初始流动相是多少啊?
艰难困苦,玉汝于成。
2楼2013-05-03 17:45:46
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匿名

用户注销 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢! 2013-05-03 23:22:01
本帖仅楼主可见
3楼2013-05-03 18:49:47
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wangzm111

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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karl2100: 金币+1, 谢谢! 2013-05-03 23:22:11
仙剑问情1203: 金币+2 2013-05-05 09:56:15
甾体物质极性大,过硅胶柱时可以先把硅胶加点水失活,或者在流动相中加一定少量的水。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
有好心态才能有好状态
4楼2013-05-03 19:35:46
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顺风顺水

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
4楼: Originally posted by wangzm111 at 2013-05-03 19:35:46
甾体物质极性大,过硅胶柱时可以先把硅胶加点水失活,或者在流动相中加一定少量的水。

同意此楼说法,流动相没有选择有点问题,极性不够,可以调整流动相。如果是梯度洗脱的话,开始走的慢也正常,换梯度再洗
5楼2013-05-04 07:22:00
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仙剑问情1203

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wm0629 at 2013-05-03 17:45:46
很正常啊,如果你只想要那个黄色的部分,可能是你给的极性不够,换个极性稍大一点的梯度走一下试试。不过梯度换的跨度不要太大,一是容易分不开,把别的东西一起洗下来。用石油醚乙酸乙酯走,样品的极性应该很小吧。 ...

我的初始流动相是石油醚和乙酸乙酯5:1,接下来是3:1,1:1,1:3,1:5,现在第二个梯度要冲完了,可是那个黄色的一直没怎么往下走,而且我把第一个梯度接的馏分跑了个薄层板子,几乎没什么东西,不知道是不是流动相不合适啊。
越努力,越幸运
6楼2013-05-04 19:56:27
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wm0629

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


仙剑问情1203: 金币+1 2013-05-05 09:56:40
引用回帖:
6楼: Originally posted by 仙剑问情1203 at 2013-05-04 19:56:27
我的初始流动相是石油醚和乙酸乙酯5:1,接下来是3:1,1:1,1:3,1:5,现在第二个梯度要冲完了,可是那个黄色的一直没怎么往下走,而且我把第一个梯度接的馏分跑了个薄层板子,几乎没什么东西,不知道是不是流 ...

应该是极性不够吧,你再换个大点的极性走走试试。
艰难困苦,玉汝于成。
7楼2013-05-04 20:39:52
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gslzzhixin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
仙剑问情1203: 金币+1 2013-05-05 09:56:46
楼上说的对,加大极性继续洗脱。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2013-05-05 09:11:14
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tandongxing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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仙剑问情1203: 金币+2 2013-05-06 09:30:33
这个就是你的洗脱机极性不够大了,你的增加极性,不过这个洗脱机极性你得事先用薄层摸好了,在你要的没出来之前,可以用极性小的冲冲杂质,你的那个黄色的色带应该很容易跑纯的,多练习练习,就会掌握很多经验
旭日东升
9楼2013-05-05 09:57:12
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仙剑问情1203

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by tandongxing at 2013-05-05 09:57:12
这个就是你的洗脱机极性不够大了,你的增加极性,不过这个洗脱机极性你得事先用薄层摸好了,在你要的没出来之前,可以用极性小的冲冲杂质,你的那个黄色的色带应该很容易跑纯的,多练习练习,就会掌握很多经验

谢谢,现在跑下来东西了,但是一检测上面一个点,下面一条带状,像这样的话,是不是很难分出单体啊,我的目的就是分出单体啊
越努力,越幸运
10楼2013-05-06 10:21:46
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