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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定量PCR如何确定样品copies/ml(需要考虑基因组的提取效率吗)
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幅度依然

银虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR如何确定样品copies/ml(需要考虑基因组的提取效率吗)

我需要做水中藻类某个基因的绝对定量，用质粒连接目的片段已经做好标曲，如何确定每毫升水中该基因的拷贝数。本打算将10ml的水经离心，弃上清，用天根的植物基因组提取试剂盒直接提取基因组DNA,再进行定量PCR，这样得出的copies为10ml水中存在的。但是基因组提取时不可能提取完全，每组水样在提取上也存在差异，怎么解决这个问题，能够精确或者尽量准确的测出每毫升的拷贝数。
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1楼 2013-05-02 10:08:17
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幅度依然

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by renzhiq at 2013-05-03 17:32:12
这简单啊，你归一化处理啊，做个内参。就可以对你的基因定量了啊……

把提出的基因组稀释到同一浓度，跟内参比较改做相对定量？
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3楼2013-05-06 14:30:56
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renzhiq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这简单啊，你归一化处理啊，做个内参。就可以对你的基因定量了啊……
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2楼2013-05-03 17:32:12
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