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幅度依然

银虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR如何确定样品copies/ml(需要考虑基因组的提取效率吗)

我需要做水中藻类某个基因的绝对定量,用质粒连接目的片段已经做好标曲,如何确定每毫升水中该基因的拷贝数。本打算将10ml的水经离心,弃上清,用天根的植物基因组提取试剂盒直接提取基因组DNA,再进行定量PCR,这样得出的copies为10ml水中存在的。但是基因组提取时不可能提取完全,每组水样在提取上也存在差异,怎么解决这个问题,能够精确或者尽量准确的测出每毫升的拷贝数。
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renzhiq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这简单啊,你归一化处理啊,做个内参。就可以对你的基因定量了啊……
2楼2013-05-03 17:32:12
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幅度依然

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by renzhiq at 2013-05-03 17:32:12
这简单啊,你归一化处理啊,做个内参。就可以对你的基因定量了啊……

把提出的基因组稀释到同一浓度,跟内参比较改做相对定量?
3楼2013-05-06 14:30:56
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