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anzaishi

银虫 (小有名气)

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[求助] 求助：2个蛋白在293FT细胞瞬转表达后做WB都偏大近一倍，怎么回事啊？

各位看官，事情的经过是这样，小弟构建2个基因到真核表达载体pcDNA3.1上，大小分别是snrpd3 381bp，ppm1b 1173bp带DDK标签，经酶切，测序鉴定正确后，瞬时转染293FT细胞，然后做WB，用DDK的抗体检测，结果两个蛋白都偏大近一倍，snrpd3蛋白在30kd，ppm1b在100多kd，不知道问题出在哪里？求各位看官，走过，路过，帮忙分析一下。小弟先行谢过了！

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[ Last edited by anzaishi on 2013-4-28 at 13:09 ]

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我们也要涨工资

1楼 2013-04-28 12:55:56

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anzaishi

银虫 (小有名气)

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专业: 神经生物学

引用回帖:

2楼: Originally posted by cywwuqi at 2013-05-02 14:03:12
理论上，pcDNA3.1载体表达真核蛋白，不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决：
1、不转染，看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内？
2、有一些WB的预染maker是需要煮过，变性后使用的，不然迁移 ...

好的，我试试，谢谢！

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我们也要涨工资

3楼2013-05-03 12:42:14

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cywwuqi

新虫 (初入文坛)

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专业: 神经生物学

【答案】应助回帖

理论上，pcDNA3.1载体表达真核蛋白，不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决：
1、不转染，看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内？
2、有一些WB的预染maker是需要煮过，变性后使用的，不然迁移率是有出入的，请你核实。

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2楼2013-05-02 14:03:12

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