应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：2个蛋白在293FT细胞瞬转表达后做WB都偏大近一倍，怎么回事啊？
31/1返回列表
查看: 1426  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

anzaishi

银虫 (小有名气)

[求助] 求助：2个蛋白在293FT细胞瞬转表达后做WB都偏大近一倍，怎么回事啊？

各位看官，事情的经过是这样，小弟构建2个基因到真核表达载体pcDNA3.1上，大小分别是snrpd3 381bp，ppm1b 1173bp带DDK标签，经酶切，测序鉴定正确后，瞬时转染293FT细胞，然后做WB，用DDK的抗体检测，结果两个蛋白都偏大近一倍，snrpd3蛋白在30kd，ppm1b在100多kd，不知道问题出在哪里？求各位看官，走过，路过，帮忙分析一下。小弟先行谢过了！

1.GIF

[ Last edited by anzaishi on 2013-4-28 at 13:09 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
我们也要涨工资
1楼 2013-04-28 12:55:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cywwuqi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

理论上，pcDNA3.1载体表达真核蛋白，不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决：
1、不转染，看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内？
2、有一些WB的预染maker是需要煮过，变性后使用的，不然迁移率是有出入的，请你核实。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-02 14:03:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anzaishi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cywwuqi at 2013-05-02 14:03:12
理论上，pcDNA3.1载体表达真核蛋白，不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决：
1、不转染，看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内？
2、有一些WB的预染maker是需要煮过，变性后使用的，不然迁移 ...

好的，我试试，谢谢！
回复此楼
我们也要涨工资
3楼2013-05-03 12:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 anzaishi 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +15 羊腰板 2026-08-21 16/800 2026-08-23 10:45 by process2012
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 07:41 by OEbVnUOu01ol
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +4 简单化xn 2026-08-22 8/400 2026-08-23 07:20 by ilovexiaobin
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 11/550 2026-08-23 02:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭