应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：2个蛋白在293FT细胞瞬转表达后做WB都偏大近一倍，怎么回事啊？
31/1返回列表
查看: 1318  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

anzaishi

银虫 (小有名气)

[求助] 求助：2个蛋白在293FT细胞瞬转表达后做WB都偏大近一倍，怎么回事啊？

各位看官，事情的经过是这样，小弟构建2个基因到真核表达载体pcDNA3.1上，大小分别是snrpd3 381bp，ppm1b 1173bp带DDK标签，经酶切，测序鉴定正确后，瞬时转染293FT细胞，然后做WB，用DDK的抗体检测，结果两个蛋白都偏大近一倍，snrpd3蛋白在30kd，ppm1b在100多kd，不知道问题出在哪里？求各位看官，走过，路过，帮忙分析一下。小弟先行谢过了！

1.GIF

[ Last edited by anzaishi on 2013-4-28 at 13:09 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
我们也要涨工资
1楼 2013-04-28 12:55:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cywwuqi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

理论上，pcDNA3.1载体表达真核蛋白，不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决：
1、不转染，看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内？
2、有一些WB的预染maker是需要煮过，变性后使用的，不然迁移率是有出入的，请你核实。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-02 14:03:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anzaishi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cywwuqi at 2013-05-02 14:03:12
理论上，pcDNA3.1载体表达真核蛋白，不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决：
1、不转染，看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内？
2、有一些WB的预染maker是需要煮过，变性后使用的，不然迁移 ...

好的，我试试，谢谢！
回复此楼
我们也要涨工资
3楼2013-05-03 12:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 anzaishi 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 081700 调剂 267分 +4 迷人的哈哈 2026-03-23 4/200 2026-03-23 13:02 by ztnimte
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 4/200 2026-03-22 11:04 by 搏击518
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭