24小时热门版块排行榜    

查看: 1425  |  回复: 2

anzaishi

银虫 (小有名气)

[求助] 求助:2个蛋白在293FT细胞瞬转表达后做WB都偏大近一倍,怎么回事啊?

各位看官,事情的经过是这样,小弟构建2个基因到真核表达载体pcDNA3.1上,大小分别是snrpd3 381bp,ppm1b 1173bp带DDK标签,经酶切,测序鉴定正确后,瞬时转染293FT细胞,然后做WB,用DDK的抗体检测,结果两个蛋白都偏大近一倍,snrpd3蛋白在30kd,ppm1b在100多kd,不知道问题出在哪里?求各位看官,走过,路过,帮忙分析一下。小弟先行谢过了!

1.GIF

[ Last edited by anzaishi on 2013-4-28 at 13:09 ]
回复此楼
我们也要涨工资
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cywwuqi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

理论上,pcDNA3.1载体表达真核蛋白,不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决:
1、不转染,看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内?
2、有一些WB的预染maker是需要煮过,变性后使用的,不然迁移率是有出入的,请你核实。
2楼2013-05-02 14:03:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anzaishi

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cywwuqi at 2013-05-02 14:03:12
理论上,pcDNA3.1载体表达真核蛋白,不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决:
1、不转染,看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内?
2、有一些WB的预染maker是需要煮过,变性后使用的,不然迁移 ...

好的,我试试,谢谢!
我们也要涨工资
3楼2013-05-03 12:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 anzaishi 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 4/200 2026-08-23 01:04 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 8/400 2026-08-22 23:51 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 10/500 2026-08-22 23:42 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见