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anzaishi

银虫 (小有名气)

[求助] 求助:2个蛋白在293FT细胞瞬转表达后做WB都偏大近一倍,怎么回事啊?

各位看官,事情的经过是这样,小弟构建2个基因到真核表达载体pcDNA3.1上,大小分别是snrpd3 381bp,ppm1b 1173bp带DDK标签,经酶切,测序鉴定正确后,瞬时转染293FT细胞,然后做WB,用DDK的抗体检测,结果两个蛋白都偏大近一倍,snrpd3蛋白在30kd,ppm1b在100多kd,不知道问题出在哪里?求各位看官,走过,路过,帮忙分析一下。小弟先行谢过了!

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[ Last edited by anzaishi on 2013-4-28 at 13:09 ]
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cywwuqi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

理论上,pcDNA3.1载体表达真核蛋白,不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决:
1、不转染,看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内?
2、有一些WB的预染maker是需要煮过,变性后使用的,不然迁移率是有出入的,请你核实。
2楼2013-05-02 14:03:12
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anzaishi

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cywwuqi at 2013-05-02 14:03:12
理论上,pcDNA3.1载体表达真核蛋白,不会改变蛋白大小。怀疑是你对错了maker。解决:
1、不转染,看293t细胞內源这两个蛋白做wb的分子量是否在预期内?
2、有一些WB的预染maker是需要煮过,变性后使用的,不然迁移 ...

好的,我试试,谢谢!
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3楼2013-05-03 12:42:14
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