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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于稀释平板计数法的疑问
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襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

[求助] 关于稀释平板计数法的疑问

1.我用的浇注法，应该24h计数还是48h计数？
2.长了24h后培养基表面的菌落很明显，但是培养基内部的菌就是一个小点点，很难看到，稀释倍数低的平板像是10倍100倍1000倍几乎全部都是一个点一个点大片大片的挺均匀根本看不清。这时该怎么计数呢？稀释度高的培养基内部也有一些点点，是表面和内部的都记上去吗？
3.我一共做了7个梯度的十倍稀释。原菌液倒平板之前的OD是1.13了，稀释十倍之后变成0.13，稀释100倍是0.01，1000居然变成0了，后面的稀释度也是0左右。那这么看来菌液里的菌很少很少很少了，可是为什么平板计数后后面OD值是0的菌长出来的菌落还挺多啊，不数那些点点就差不多在30-300之间，数了差不多1000以上了。。。。
不懂怎么计数。我是想做一个CFU与OD之间关系的曲线来着。

是不是该等平板培养一段时间的同时要将相应稀释倍数的菌同等条件培养呢？是不是菌在平板里扩大培养了所以之前测的OD值是不对的？

[ Last edited by 襄阳蓉儿 on 2013-4-28 at 11:46 ]
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少壮不努力，长大pcr
1楼 2013-04-28 11:28:10
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zjm104273

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 襄阳蓉儿 at 2013-05-02 10:23:23
2.我稀释第7个10倍数出来的是100个菌落，每个平板接种的是0.2ml那计算公式应该是100*5*10（7次方）=5*10（9次方），那就是原菌液是这个浓度的是吧，那我需要1*10（6次方），这个是不是把我的原菌液稀释5000倍，是这 ...

2 是的，但不是把原菌液稀释5000倍，而是梯度稀释，或者说取你第3个稀释梯度再做调整。
3、你的第7个10倍稀释取0.2ml有100个菌落，那说明你该梯度的菌液每ml菌数目大概是500个，这个数目是非常少的啊，溶液透明，od是0很正常。。。，
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16楼2013-05-07 15:44:20
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bingge880306

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, 鼓励交流应助！ 2013-05-03 20:31:36
关于第一个问题，24小时应该就可以了，时间太长菌落数就难以确定了，后期就都长在一起了，而且后期也有抑制作用了
第二个问题其实都做几个平行试验就可以了，不用计数稀释度低的吧，只要把稀释到最后的菌落数合适的那个梯度多做几个平行试验不就可以倒推回原菌落数吗
第三个问题可能你的操作不当，在空气中就染菌了，是在酒精灯范围内操作的吗？应在酒精的火焰周围15厘米的范围内操作才可以保证不染菌。
希望能帮到你啊
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2楼2013-04-28 13:59:48
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襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bingge880306 at 2013-04-28 13:59:48
关于第一个问题，24小时应该就可以了，时间太长菌落数就难以确定了，后期就都长在一起了，而且后期也有抑制作用了
第二个问题其实都做几个平行试验就可以了，不用计数稀释度低的吧，只要把稀释到最后的菌落数合适的 ...

谢谢你
2.倒推的意思是，假如说我的第五个十倍稀释是50个菌落，那倒退回第四个十倍稀释就是500个？
3.你的意思是说培养基内部的小点点是杂菌？不会吧，因为高浓度菌液长出来的是很密密麻麻的小点点，我是倾注平板不是涂布平板所以培养基内部也会有菌的吧？
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少壮不努力，长大pcr
3楼2013-04-28 14:30:57
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bingge880306

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

2.对呀
3.换个培养基试试呢
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4楼2013-04-28 19:40:30
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