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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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8楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-04-28 12:28:10
离子交换过程2楼说的很好。麻烦问你一下,你的这个蛋白是类病毒颗粒,他是包裹你的质粒DNA,还是结合你的DNA?结合的话,我想超声,加核酸酶等处理应该有效,要是包裹的,核酸酶可能作用不到。再者,你过离子交换的 ...

你们用的是GE 的FPLC么?
我不知道可以开260灯呢?怎么开?是附加模块么?
11楼2013-04-28 12:43:48
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


sxxuan: 金币+1, 有帮助 2013-04-28 13:38:52
引用回帖:
10楼: Originally posted by sxxuan at 2013-04-28 12:42:54
惨了,是phenyl~我以前试过加甘油或者30%异丙醇洗,都很难洗脱下来。当时用的是0.5M的磷酸缓冲液+1~2M的硫酸铵。
如果用氯化钠也可以的话,那我就不用硫酸铵了,那下次我试试。这样就不用另外配试剂了。
谢谢你的 ...

不客气。慢慢来,蛋白纯化要多试,抗打击能力要强。
加油
12楼2013-04-28 12:59:08
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
sxxuan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-04-28 13:39:25
引用回帖:
11楼: Originally posted by dshlove at 2013-04-28 12:43:48
你们用的是GE 的FPLC么?
我不知道可以开260灯呢?怎么开?是附加模块么?...

GE的AKTA。FPLC的话不能同时开2个灯,只能开280或者260中一个,具体方法检测后面有个卡尺似的东西,就可以拨到280或者拨到260,关机状态拨。其他AKTA可以直接开2个灯,也有3个灯的,可以同时检测280,256,215三个波长。同时检测的话,我觉得可以知道核酸含量。另外,核酸酶处理时间长一点。
13楼2013-04-28 13:02:13
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

弱弱的问一个,你的蛋白是一条链2500KD,还是多亚基一共2500KD?
14楼2013-04-28 13:05:15
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-04-28 13:05:15
弱弱的问一个,你的蛋白是一条链2500KD,还是多亚基一共2500KD?

是复合体,很多亚基组成的2500kD
你的日子如何,你的力量也必如何!
15楼2013-04-28 13:37:52
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by dshlove at 2013-04-28 12:59:08
不客气。慢慢来,蛋白纯化要多试,抗打击能力要强。
加油...

谢谢,我会继续努力,看到你们的回答后,我又充满斗志了!
你的日子如何,你的力量也必如何!
16楼2013-04-28 13:38:46
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-04-28 13:02:13
GE的AKTA。FPLC的话不能同时开2个灯,只能开280或者260中一个,具体方法检测后面有个卡尺似的东西,就可以拨到280或者拨到260,关机状态拨。其他AKTA可以直接开2个灯,也有3个灯的,可以同时检测280,256,215三个 ...

好的,五一假期回来后再马上尝试一下!
你的日子如何,你的力量也必如何!
17楼2013-04-28 13:39:17
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-04-28 13:02:13
GE的AKTA。FPLC的话不能同时开2个灯,只能开280或者260中一个,具体方法检测后面有个卡尺似的东西,就可以拨到280或者拨到260,关机状态拨。其他AKTA可以直接开2个灯,也有3个灯的,可以同时检测280,256,215三个 ...

我的也是GE的AKTA,因为此前听说只能开一个,检测了核酸就不能检测蛋白,所以没有问同事究竟可不可以,下次做的时候再问问他是否可以。
现在核酸酶处理是37℃ 1h,最多试过4h。感觉效果差不多
另外只用溶菌酶处理菌体后离心,没有做超声,是不是超声破碎对破坏质粒也有作用?
谢谢
你的日子如何,你的力量也必如何!
18楼2013-04-28 13:42:18
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
sxxuan: 金币+2, 有帮助 2013-04-28 13:54:31
引用回帖:
15楼: Originally posted by sxxuan at 2013-04-28 13:37:52
是复合体,很多亚基组成的2500kD...

多亚基蛋白,离子交换,考虑有没有亚基丢失。某些峰可能不是你复合体的峰,而是某些亚基。
19楼2013-04-28 13:43:37
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

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sxxuan: 金币+1, 有帮助 2013-04-28 13:54:39
引用回帖:
18楼: Originally posted by sxxuan at 2013-04-28 13:42:18
我的也是GE的AKTA,因为此前听说只能开一个,检测了核酸就不能检测蛋白,所以没有问同事究竟可不可以,下次做的时候再问问他是否可以。
现在核酸酶处理是37℃ 1h,最多试过4h。感觉效果差不多
另外只用溶菌酶处理 ...

我核酸酶处理一般都低温过夜。超声可以破坏DNA。换一台AKTA。
20楼2013-04-28 13:47:03
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