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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB中的NF-kB的趋势如此怪异！！！！！！！！！！！！！
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929323

铜虫 (小有名气)

[求助] WB中的NF-kB的趋势如此怪异！！！！！！！！！！！！！ 已有1人参与

各位虫友们，小弟我用某种药物诱导神经细胞产生炎症反应，然后跑了WB，结果磷酸化的NF-kB的趋势实在是怪异，4，8，12，24小时的诱导中唯独8小时的完全没有磷酸化的NF-kB,我平行做了好多个，也重复做了好多次，每次都这样，问问各位虫友，有没有经历过这样的情况的，可否给个可能的解释呢？

Screen Shot 2013-04-26 at 7.48.20 PM.png
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1楼 2013-04-26 19:50:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
929323(gyesang代发): 金币+2, 鼓励应助交流！ 2013-04-28 02:46:26
引用回帖:
7楼: Originally posted by 929323 at 2013-04-27 11:05:38
我的上样量是一样的 都是30微，也同时跑的内参GAPDH，但是内参很清晰。内参的表达量也差不多！！！...

上样一般不能按体积，需要做蛋白定量，然后上同样微克数的蛋白。内参表达量差不多是什么概念？一般是需要一样，对目标蛋白和内参都要做一个线性梯度，确定抗体线性工作范围，然后把目标蛋白和内参的灰度分别定量，然后做目标蛋白对内参的相对含量。
根据你的实验现象，如果是重复结果的话，你可能需要增加取样点。比方说做4,6,8,12小时。此外，你做的是磷酸化的NF-kB，有可能的话最好对样品做总NF-kB的定量。
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8楼2013-04-27 14:17:48
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929323

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-26 20:07:23
胶袍得好丑

问题不是丑不丑的问题！！！！！！！
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3楼2013-04-26 20:53:18
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-27 08:33:30
本帖内容被屏蔽
4楼2013-04-26 21:12:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做一下内参蛋白的western，确定equal loading。我觉得可能是样品上样量或者提取时出了问题。
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5楼2013-04-27 08:58:14
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