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929323

铜虫 (小有名气)

[求助] WB中的NF-kB的趋势如此怪异!!!!!!!!!!!!!已有1人参与

各位虫友们,小弟我用某种药物诱导神经细胞产生炎症反应,然后跑了WB,结果磷酸化的NF-kB的趋势实在是怪异,4,8,12,24小时的诱导中唯独8小时的完全没有磷酸化的NF-kB,我平行做了好多个,也重复做了好多次,每次都这样,问问各位虫友,有没有经历过这样的情况的,可否给个可能的解释呢?

Screen Shot 2013-04-26 at 7.48.20 PM.png
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929323

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-26 20:07:23
胶袍得好丑

问题不是丑不丑的问题!!!!!!!
3楼2013-04-26 20:53:18
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普通回帖

panyuzhu

禁虫 (小有名气)

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2楼2013-04-26 20:07:23
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-27 08:33:30
本帖内容被屏蔽

4楼2013-04-26 21:12:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做一下内参蛋白的western,确定equal loading。我觉得可能是样品上样量或者提取时出了问题。
5楼2013-04-27 08:58:14
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

6楼2013-04-27 09:46:10
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929323

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-27 08:58:14
做一下内参蛋白的western,确定equal loading。我觉得可能是样品上样量或者提取时出了问题。

我的上样量是一样的 都是30微,也同时跑的内参GAPDH,但是内参很清晰。内参的表达量也差不多!!!
7楼2013-04-27 11:05:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
929323(gyesang代发): 金币+2, 鼓励应助交流! 2013-04-28 02:46:26
引用回帖:
7楼: Originally posted by 929323 at 2013-04-27 11:05:38
我的上样量是一样的 都是30微,也同时跑的内参GAPDH,但是内参很清晰。内参的表达量也差不多!!!...

上样一般不能按体积,需要做蛋白定量,然后上同样微克数的蛋白。内参表达量差不多是什么概念?一般是需要一样,对目标蛋白和内参都要做一个线性梯度,确定抗体线性工作范围,然后把目标蛋白和内参的灰度分别定量,然后做目标蛋白对内参的相对含量。
根据你的实验现象,如果是重复结果的话,你可能需要增加取样点。比方说做4,6,8,12小时。此外,你做的是磷酸化的NF-kB,有可能的话最好对样品做总NF-kB的定量。
8楼2013-04-27 14:17:48
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有磷酸化的NF-KB这样的蛋白么,不是做P65的磷酸化么?
这个写法是不是有问题啊
9楼2013-04-27 20:32:16
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klsmgm

铜虫 (小有名气)

兄弟,你跑的蛋白是核蛋白,还是总蛋白
10楼2013-06-05 11:58:05
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