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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因克隆
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

[求助] 基因克隆

各位虫友，最近我正在克隆Kan基因，用的是pFA-6Kan MAX作为模板，PCR后，跑胶有时候会出现图片中的情况，不知道什么原因，请各位大神指教指教！！谢谢了

Kan PCR  13-4-25.jpg
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1楼 2013-04-26 16:10:35
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sheng-ping

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
成像仪要调节一下
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城市农民
2楼2013-04-26 16:16:28
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longshelan1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板浓度是不是很高，应该稀释一下再进行PCR
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3楼2013-04-26 16:23:53
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senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-26 18:08:21
模板浓度太高，没有p出来吧，优化一下PCR条件或者换一下引物！
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做实验就是和上帝玩游戏！
4楼2013-04-26 17:25:49
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sheng-ping at 2013-04-26 16:16:28
成像仪要调节一下

哪个参数需要调啊
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5楼2013-04-26 18:51:54
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by longshelan1 at 2013-04-26 16:23:53
模板浓度是不是很高，应该稀释一下再进行PCR

我是以刚提的质粒为模板，没有稀释，只加了1ul啊
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6楼2013-04-26 18:53:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
20083630zhan: 金币+4, ★有帮助 2013-04-27 15:15:41
引用回帖:
6楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-04-26 18:53:17
我是以刚提的质粒为模板，没有稀释，只加了1ul啊...

质粒模板只需要pg级别的，提出来的质粒都是几百ng/μl，明显加太多模板了。你需要稀释模板100-1000倍再P。
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7楼2013-04-27 09:03:41
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-27 09:03:41
质粒模板只需要pg级别的，提出来的质粒都是几百ng/μl，明显加太多模板了。你需要稀释模板100-1000倍再P。...

OK，谢谢了
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8楼2013-04-27 15:15:29
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angxuewin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提高PCR的退火温度
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9楼2013-04-27 15:18:43
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冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议你换一下引物。从图上来看明显P的不太好。模板应该不需要稀释，我一直都是提质粒直接P的，好像也没什么问题。
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10楼2013-05-07 09:23:27
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