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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » C18柱压过高。。。
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swallow13

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
11楼2013-04-26 11:43:13
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heyidong

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

C18 一般不能反接 ，这只是理论上，实际上：一般柱子若是柱压高，通过洗柱的方法还没能降低压力，可以反接用低流速冲洗的，一根柱子一般堵塞或者填料坏了，都是柱头部位的1-3mm处，除非有专业的工具用来装填。不然你堵塞后正向冲洗会更加堵塞，反接效果会更好

若是峰形分叉，说明柱子已经到了生命的极限，一般再生后会拖尾等等，若要求不高可以继续使用。相反可以反接继续使用，一般反接后峰形会变好，拖尾会减少，但是柱的使用寿命几乎完结，反接后的柱子不在建议再次正接后使用，若这柱子已经废弃，可以采纳

一般学校老板的项目奖金不多时或者抠门时可以这样用。

向我们做研发时这样用，申报资料时就不用。视情况而定
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伤不起
12楼2013-04-26 12:40:11
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heyidong

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by swallow13 at 2013-04-26 11:42:13
晕 5%硝酸冲柱子 你柱子不想要了吗？lz 你之前走的是什么样品？显然是有杂质堵柱子了 如果纯甲醇纯乙腈冲洗没用的话 可以尝试用DMF或者DMSO低流速来洗一下柱子 主要还是要根据样品种类来选择对应的洗涤剂 比如蛋白样 ...

稀硝酸是不接柱子好不
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伤不起
13楼2013-04-26 12:42:07
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sdzktd

木虫 (正式写手)

美丽家族三当家

【答案】应助回帖

★
ainim: 金币+1 2013-05-08 09:43:09
引用回帖:
8楼: Originally posted by ainim at 2013-04-26 11:06:27
这不是我平常的循环方式，我平常做完后用90%水10%甲醇一个半小时，50%甲醇一个半小时，纯甲醇1小时，都是1ml/min。我这次纯甲醇和50%甲醇循环冲是因为我奇怪为什么用纯甲醇把柱压冲下来以后换成50%甲醇冲，柱压怎么 ...

1、这样看的话，一二针都不出峰，第三针在奇怪的时间出了奇怪的峰，说明你柱子确实有了问题，接双通1ml/min20PSI，系统应该没多大问题，柱子是不是用的时间太久了？建议lz以后如果做样，流动相用的是乙腈缓冲盐就用10%乙腈过渡，乙腈保存，甲醇缓冲盐就用甲醇水过渡，甲醇保存，有的样在不同溶剂溶解度相差很大，进系统有可能析出，对柱子和系统都有损害，直接降低柱子使用寿命，这样样品也不会出峰的。
2、除非系统很脏，5%稀硝酸是冲系统，是不能过柱子的，检测器好像也不能接。
3、要是这个柱子用的时间太久，正常使用已不能满足要求，C18可以反冲，反正都快报废了，反冲使用有时候还能用。
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belivemesuccess!!
14楼2013-04-26 14:21:38
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
9楼: Originally posted by ainim at 2013-04-26 11:09:07
确定是柱子堵，接双通PSI是20多，这个5%稀硝酸是叫做钝化么？C18可以反接么？...

柱子堵了，首先确定是无机盐堵塞还是溶剂质量不好造成的堵塞，如果无机盐堵塞你就只能用纯水加点醋酸这样冲，如果是溶剂不好造成的堵塞可以考虑用强溶剂配成水溶液冲洗，比如1%的异丙醇
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15楼2013-04-26 15:49:40
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饿到天明

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
倒接，用异丙醇低流速冲冲，别接检测器
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16楼2013-04-26 20:48:09
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行进使者

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是柱子进杂质堵住了，可以小流量的乙腈冲洗一段时间看看，实在不行可以反接柱子冲洗一下试试！
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吸取经验，请教学习。
17楼2013-04-26 21:01:48
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shanshui7163

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意2楼和14楼的意见,首先要确定是柱子堵还是系统堵,逐步找出原因。稀硝酸不能过柱子，也不能过检测器，接两通外排。再者14楼说的wash程序很重要，你可以借鉴。
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18楼2013-04-28 10:31:19
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cucucmlar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
ainim: 金币+1 2013-05-08 09:47:59
引用回帖:
8楼: Originally posted by ainim at 2013-04-26 11:06:27
这不是我平常的循环方式，我平常做完后用90%水10%甲醇一个半小时，50%甲醇一个半小时，纯甲醇1小时，都是1ml/min。我这次纯甲醇和50%甲醇循环冲是因为我奇怪为什么用纯甲醇把柱压冲下来以后换成50%甲醇冲，柱压怎么 ...

首先纯甲醇冲洗色谱柱的时候，柱压肯定是会比甲醇水或甲醇缓冲盐冲洗柱子的时候压力低的啊，你用纯甲醇冲柱子压力低了不代表那会你的柱子就不堵了，也不代表柱子压力就下来了，另外，50%的甲醇和50%水这个比例刚好是甲醇水溶液粘度最大的时候的比例，所以一般用50-60%甲醇水溶液冲洗柱子的时候，柱压是最大的，当甲醇比例再减小，柱压又会降低，所以，甲醇水溶液比例不一样，柱压肯定也会不一样。你现在的问题估计是做完实验后缓冲盐冲的不够干净，或者是样品中含盐量太高没有冲洗干净，现在要彻底冲洗色谱柱，可以设置95%的水和5%的甲醇溶液，0.2~0.5mL/min的流速冲洗过夜或冲上十几二十小时。
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19楼2013-04-28 15:15:25
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ainim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by swallow13 at 2013-04-26 11:42:13
晕 5%硝酸冲柱子 你柱子不想要了吗？lz 你之前走的是什么样品？显然是有杂质堵柱子了 如果纯甲醇纯乙腈冲洗没用的话 可以尝试用DMF或者DMSO低流速来洗一下柱子 主要还是要根据样品种类来选择对应的洗涤剂 比如蛋白样 ...

我木有用稀硝酸冲柱子，那是前面的亲建议的...我之前走的是有机酸，用的磷酸缓冲盐溶液，现在好了 虽然柱压还没降到以前的水平 但是已经可以用了 谢谢你啦~
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刘涛...
20楼2013-05-08 09:37:00
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